Згодна з цэнтральнай догмай, інфармацыйная РНК (мРНК) з'яўляецца мостам для перадачы генетычнага матэрыялу ад ДНК да бялкоў.
мРНК адыгрывае біялагічную ролю, кадуючы бялкі in vivo, і спелая мРНК у эукарыётычных арганізмах складаецца з пяці кампанентаў: 5' Cap (структура крышкі), 5' UTR (некадуючая вобласць), ORF (адкрытая рамка счытвання), 3' UTR , і 3' хвост polyA (хвост поліадэнілату).
Працэс | Дадатковая паслуга | Падрабязнасці аб паслузе | Тэрмін дастаўкі (дзень) |
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці мРНК | Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасцей кадавання |
Выраўноўванне паслядоўнасці CDS Аптымізацыя кодона CDS |
1 |
Дызайн і аптымізацыя некадуючых паслядоўнасцей |
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці 5' UTR Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці 3' UTR праектаванне і аптымізацыя паслядоўнасці polyA |
1-2 |
5' UTR/3' UTR |
|
3' PolyA хвост |
|
Кампаненты мРНК | Біялагічныя функцыі | Стратэгіі аптымізацыі |
5' Кап | Абараніце мРНК ад дэградацыі экзануклеазамі і дзейнічайце сумесна з хвастом polyA на 3'-канцы, бялком, які звязвае polyA, і бялком фактару ініцыяцыі трансляцыі, каб ініцыяваць трансляцыю бялку. | Натуральная структура Cap1 пазбягае рэцэптараў распазнавання вобразаў і, такім чынам, зніжае натуральны імунны адказ, што можа быць дасягнута аднаэтапным або двухэтапным ферментатыўным каўпачэннем [падрабязнасці гл. |
5' УТР | 5' UTR можа распазнавацца рыбасомамі, рэгуляваць трансляцыю мРНК і ўплываць на стабільнасць мРНК. | Утрымліваюць паслядоўнасці Козака без вельмі стабільнай другаснай структуры. Натуральныя UTR генаў з высокай экспрэсіяй з'яўляюцца пераважнымі для мРНК транскрыпцыі in vitro (IVT), такіх як α-глабін і β-глабін. |
CDS | Вобласці, якія кадуюць бялок, і паслядоўнасці, якія кадуюць антыгены, антыцелы або іншыя функцыянальныя бялкі. | Аптымізацыя кадонаў павышае ўзровень трансляцыі, адзначаючы, што некаторыя неаптымальныя кадоны могуць гуляць пэўную ролю ў згортванні бялку. |
3' УТР | Рэгулююць трансляцыю і стабільнасць мРНК. | Натуральныя UTR генаў з высокай экспрэсіяй з'яўляюцца пераважнымі для мРНК IVT, такіх як α-глабін і β-глабін. |
3' поліА хвост | Рэгулююць экспрэсію бялку і абараняюць структуру шапкі ад дэградацыі. | Неабходная адпаведная даўжыня (100-150 пн); кадзіраванне хваста polyA на плазмідзе шаблону транскрыпцыі забяспечвае больш пэўную даўжыню хваста polyA. |
Некалькі крыніц высока выяўленых натуральных і мадыфікаваных бібліятэк UTR; спелая стратэгія мадыфікацыі UTR;
Супрацоўнічайце з прафесійнай групай алгарытмаў штучнага інтэлекту, каб завяршыць аптымізацыю кодонаў.
Дадайце паслядоўнасці поліА ў адпаведнасці з шаблонамі ДНК, каб больш дакладна кантраляваць даўжыню мРНК.
Дасягнуць эфектыўнай экспрэсіі мРНК з нізкай імунагеннасць.
Дызайн паслядоўнасці мРНК з падвойным рэпарцёрам: мРНК mCherry-eGFP
Сэрвіс мРНК кампаніі Yaohai Bio-Pharma працягвае мадэрнізавацца за кошт распрацоўкі і аптымізацыі тандэмнай паслядоўнасці двайнога рэпарцёрнага гена, якая дасягае сумеснай экспрэсіі двайных генаў.
Выкарыстоўваючы звычайны рэагент для трансфекцыі, тандэмная паслядоўнасць двайнога гена mCherry-eGFP мРНК трансфікуецца ў клеткі 293T, і два флуарэсцэнтныя сігналы mCherry (чырвоны) і ўзмоцнены зялёны флуарэсцэнтны бялок (eGFP) выяўляюцца з адначасовай экспрэсіяй праз 48 гадзін, і стэк графік вылучаны жоўтым колерам.
Экспрэсія мРНК mCherry-eGFP у клетцы 293T