Значэнне развіцця працэсаў уверх па плыні
Уверх па плыні працэс (USP), таксама вядомы як працэс ферментацыі, з'яўляецца адным з пачатковых этапаў вышэй па плыні біяапрацоўкі. Працэс мікробнай ферментацыі мае вырашальнае значэнне для культуры клетак высокай шчыльнасці і экспрэсіі экзагенных генаў, што непасрэдна ўплывае на выхад і кошт біяпрэпаратаў.
На ранніх стадыях распрацоўкі біяпрэпаратаў (даклінічная або фаза 1/2) у цэнтры ўвагі распрацоўка маштабуемых працэсаў без жывёл з прамежкавым выхадам і адпаведнасцю ўсім стандартам якасці прадукцыі.
На апошніх стадыях (фаза 3 або камерцыйная) мы засяродзімся на ўраджайнасці, надзейнасці, маштабаванасці і ўзнаўляльнасці, ствараючы эканамічна эфектыўны працэс. Мерапрыемствы, якія вырашаюць гэтыя праблемы, - гэта характарыстыка працэсу і даследаванні праверкі працэсу. У той жа час звычайна прымяняюцца інструменты якасці па распрацоўцы (QbD) і распрацоўкі эксперыментаў (DoE).
Ключавыя словы: распрацоўка працэсу, аптымізацыя і валідацыя, працэс ферментацыі, ферментацыя мікробных клетак, ферментацыя бактэрый, ферментацыя дрожджаў, ферментацыя высокай шчыльнасці, ферментацыя інжынернага штаму
Прымяненне: Біяфармацэўтычная прамысловасць, медыцына для чалавека, медыцына для жывёл, вакцына, рэкамбінантныя біяпрэпараты з вялікай малекулай, рэкамбінантныя біяпрэпараты, біялагічны рэагент
Рашэнні USP кампаніі Yaohai Bio-Pharma
Карыстаючыся больш чым 10-гадовым вопытам мікробнай ферментацыі, Yaohai Bio-Pharma валодае вопытам, каб дапамагчы вырашыць праблемы працэсу ферментацыі. Мы можам хутка стварыць стратэгіі ферментацыі высокай шчыльнасці Кішачная палачка (кішачная палачка) перыплазматычная сакрэцыя, унутрыклеткавая экспрэсія растваральных або ўключаных цельцаў і пазаклеткавая або ўнутрыклеткавая экспрэсія дрожджаў.
Нашы даступныя агульныя паслугі па развіцці ферментацыі ўключаюць:
- Дызайн працэсу ферментацыі выконваецца ў невялікім аб'ёме 7 л у перыядычным рэжыме з падачай
- Праверка трохсерыйнага працэсу ў ферментерах аб'ёмам 7 л
- Прамежкавы маштаб працэсу да 30 л/70 л
Мы можам гібка выконваць шматпараметрачную аптымізацыю для задавальнення жаданай ураджайнасці або прапорцыі, выкарыстоўваючы аднаразовы фактар (OTAF) або праектаванне эксперыментаў (DoE).
Асноўныя параметры закісання пералічаны наступным чынам:
Кампазіцыі ферментацыйных асяроддзяў без жывёл
Без антыбіётыкаў ці без іх, аб'ём прышчэпкі
Тэмпература росту, pH, узровень растворанага кіслароду (DO).
Рэжым кармлення (напрыклад, перыядычнае кармленне)
Канцэнтрацыя індуктара (напрыклад, IPTG, метанол), кропка індукцыі (вільготная маса клеткі/OD600),
Тэмпература індукцыі, час індукцыі
і г.д.
Падрабязнасці аб паслузе
| Паслугі |
тэхналагічны працэс |
| Вырошчванне ў колбе для ўстрэсвання (500 мл) |
Падрыхтоўка асяроддзя без жывёл → Вырошчванне мікробнага насення → Вырошчванне ў шейкере → Індукцыя → Ураджай |
| Вырошчванне ў ферментатары (7 л) |
Падрыхтоўка асяроддзя без жывёл → Вырошчванне мікробнага насення → Ферментацыя клетак высокай шчыльнасці ў біярэактары 7 л → Індукцыя → Ураджай |
| Кантроль якасці бялкоў/пептыдаў |
Папярэдняя апрацоўка Унутрыклеткавая растваральная экспрэсія: збор мікробных клетак і рэсуспендаванне → Ультрагукавое драбненне → Выдаленне клетачнага смецця → Сырой экстракт Экспрэсія цела ўключэння: збор мікробных клетак і рэсуспендаванне → Ультрагукавое драбненне → падрыхтоўка цельца ўключэння→ Сырой экстракт Пазаклеткавая растваральная экспрэсія: збор супернатанту культуры → Канцэнтрацыя і буфер абмен → Сырой экстракт Аналіз якасці Сырой экстракт у якасці ўзору → Аналіз мэтавага бялку з дапамогай SDS PAGE або Вестэрн-блот (WB) |
| Кантроль якасці плазмид |
Папярэдняя апрацоўка і аналіз якасці Экстракцыя плазміды → аналіз ДНК з дапамогай электрафарэзу ў агарозным гелі |
Кейс
Наш заказчык даручыў нам павялічыць мэтавы выхад поліпептыднага гармона з 8 г/л да 10 г/л.
На аснове поўнага фактарнага дызайну і дызайну паверхні водгуку ў інструментах DoE мы хутка распазналі і аптымізавалі ключавыя параметры ферментацыі. Пры аптымізаваным працэсе ферментацыі з высокай шчыльнасцю клетак узровень экспрэсіі павялічыўся да 10 г/л.
Наш вопыт
- Мы працавалі над рознымі тыпамі мікробных гаспадароў, напрыклад, E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Піхія пастырская (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, штам PichiaPink1/2/3/4; сахаромицеты (S. cerevisiae) і Ганзенула паліморфная (H. polymorpha).
- У нас ёсць вопыт E. палачкі перыплазматычная сакрэцыя, экспрэсія растваральных і цельца ўключэння, а таксама ўнутрыклеткавая або пазаклеткавая экспрэсія дрожджаў. Выхад цельцаў ўключэнняў дасягае 10 г / л, у той час як выхад растваральнага бялку вагаецца ад 0.5 да 15 г / л.
- Мы ўдзельнічалі ў распрацоўцы і вытворчасці розных вялікіх малекул, у тым ліку рэкамбінантных субадзінакавых вакцын, вірусападобных часціц (VLP), гармонаў (інсулін, GLP-1, гармон росту), цітокіны (інтэрлейкін-2/IL-2, IL -15, IL-21), фактары росту (EGF, FGF, NGF), нанацелы / аднадаменныя антыцелы (sdAbs), ферменты і г.д.
- Абсталяванне
Сістэма ферментацыі 7L*16
Cedex Bio Analyzer, аналізатар Bioprocess
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
