Кольцавая мРНК (circRNA) шырока выкарыстоўваецца ў вывучэнні функцый генаў або бялкоў. Між тым, ён папулярны ў распрацоўцы прафілактычных і лячэбных біяпрэпаратаў, падобных мРНК.
Yaohai Bio-Pharma стварыла набор тэхналогій сінтэзу circRNA для забеспячэння высакаякаснай РНК, такіх як распрацоўка і аптымізацыя паслядоўнасці, транскрыпцыя in vitro (IVT), цыркулярізацыя/цыклізацыя, ачыстка і інкапсуляцыя ліпідных наначасціц (LNP). Уся прадукцыя выпускаецца ў адпаведнасці са строгімі стандартамі кантролю якасці (QC).
У параўнанні з лінейнай мРНК, кальцавая РНК (circRNA) больш стабільная па структуры і з'яўляецца галоўнай гарачай кропкай у сучасных даследаваннях лекаў нуклеінавых кіслот. Ён мае шырокі спектр прымянення ў розных галінах, як кадуючая circRNA, так і некадзіруючая circRNA, у тым ліку прафілактычныя вакцыны супраць інфекцыйных захворванняў, тэрапеўтычныя анкалагічныя вакцыны, тэрапеўтычныя анкалагічныя прэпараты, бялковая замяшчальная тэрапія, рэгенератыўная медыцына, клеткавая і генная тэрапія (CGT) , роля малекулярнай губкі і аптамера РНК.
Працэс | Дадатковая паслуга | Падрабязнасці аб паслузе | Тэрмін дастаўкі (дзень) |
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці circRNA | Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасцей кадавання | Аптымізацыя CDS Codon | 1 |
Дызайн і аптымізацыя некадуючых паслядоўнасцей | Паслядоўнасць інтрона і экзона, дызайн і аптымізацыя гамалагічнай рукі і спейсера | 1-2 | |
Атрыманне кругавой плазміды | Сінтэз генаў | Генны сінтэз (трэці бок) | 7-10 |
Ампліфікацыя плазмид | Ампліфікацыя плазмид | 2 | |
Вылучэнне плазмид | |||
Атрыманне лінеарызаванай плазміды | Лінеарызацыі і ачысткі плазмид | Лінеарызацыя плазмід | 1 |
Ачыстка ДНК лінеарызацыі | |||
Транскрыпцыя і цыклізацыя in vitro | Транскрыпцыя і цыклізацыя in vitro | Рэакцыі транскрыпцыі і цыклізацыі in vitro | 1-2 |
Страваванне РНКазы R | |||
Аптымізацыя - неабавязкова | Склад рэакцыі, аптымізацыя часу | 2-5 | |
ачыстка circRNA | Традыцыйны метад ачысткі | Ападкі хларыду літыя | 1 |
Ачыстка магнітнымі шарыкамі | 1 | ||
Высокачыстая ачыстка circRNA | Прэпаратыўная высокаэфектыўная вадкасная храматаграфія (ВЭЖХ) | 1-2 | |
Абмен буферам | Ультрафільтрацыя | 1 | |
лиофилизация circRNA | Ўзор запаўнення | Запаўненне | 2-3 |
Ліофілізацыя | Папярэдняя замарозка | ||
Першасная сушка (сублімацыя) | |||
Другасная сушка (дэсорбцыя) | |||
інкапсуляцыя circRNA-LNP | Інкапсуляцыя LNP | Папярэдняя апрацоўка матэрыялу і вадкасці | 2 |
Мікрафлюідныя прылады для змешвання | |||
Абмен буферам | Фільтрацыя па датычнай плыні | 1 | |
стэралізаваны | Фільтраванне | ||
Кантроль якасці плазмидной ДНК | Канцэнтрацыя / чысціня | Ультрафіялетавая (УФ) спектрафатаметрыя | 1-2 |
Канфармацыя плазміды | Электрафарэз у агарозным гелі (AGE) | ||
Капілярны электрафарэз (КЭ) - неабавязковы | |||
Ідэнтыфікацыя плазміды | Ідэнтыфікацыя ферментаў рэстрыкцыі/AGE | ||
Кантроль якасці circRNA | Канцэнтрацыя / чысціня | Ультрафіялетавая (УФ) спектрафатаметрыя | - |
Чысціня | Электрафарэз у агарозным гелі (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
ВЭЖХ-неабавязкова | 1 | ||
Кантроль якасці circRNA-LNP | Эфектыўнасць інкапсуляцыі | Метад RiboGreen | 1 |
Памер часціц | Дынамічнае рассейванне святла (DLS) | 1 | |
Індэкс полидисперсности | Дынамічнае рассейванне святла (DLS) | 1 | |
Дзета-патэнцыял | Дынамічнае рассейванне святла (DLS) | 1 | |
Клеткавы аналіз патэнцыі | Трансфекцыя клетак | Высяванне клетак, трансфекцыя клетак | 4 |
Выяўленне мэтавага бялку | Назіранне флуарэсцэнцыі, Вестэрн-блот/ІФА | 1-3 |
Мы трансфікавалі пашыраную circRNA зялёнага флуарэсцэнтнага бялку (eGFP circRNA), circRNA mCherry, circRNA люцыферазы ў клеткі 293T і выявілі бялок-мішэнь з дапамогай флуарэсцэнцыі, люмінесцэнтнага або каляровага сігналу, вестэрн-блот (WB), імунаферментнага аналізу (ELISA).
Клеткавыя аналізы патэнцыі ўзораў circRNA Yaohai Bio-Pharma