Цыклічная mRNA (circRNA) шырока выкарыстоўваецца ў даследаванні функцый генаў ці белкаў. Падобна на mRNA, яна таксама папулярная ў разработцы прафілатычных і лічацельных біягалактараў.
Yaohai Bio-Pharma стварыла набор тэхналогій сінтэза circRNA для атрымання вышэйшага якасці RNA, уключаючы дызайн і аптымізацыю секвенцыі, транскрыпцыю за межамі організму (IVT), цыклізацыю, чыстку і энкапсуляцыю ў ліпідных наначастках (LNP). Усе produkty выдаюцца па строгім стандартзе кантролю якасці (QC).
У порівненні з лінейным mRNA, цыркуляры RNA (circRNA) больш стаялы ў структуры і яўляецца галоўным гарачым пунктом у сучасных даследаваннях лікаў на аснове нуклеінных кислот. Унікальныя прыклады застосавання ёсць ў розных галінах, хто і кака circRNA - кодуючая ці не кодуючая, уключна прывяклівыя вакцыны ад інфекцыянных захворванняў, лікавыя онкалагічныя вакцыны, лікавыя онкалогічныя лікі, тэрапія замены белкаў, рэгенератыўная медицына, клеточная і генаўняя тэрапія (CGT), молекулярная спандыраючая рола і RNA-аптамеры.
ПРОЦЕС | Апцыянальная служба | Дэталі сервісу | Перыяд дастаўкі (Дзень) |
дызайн і аптымізацыя секвенцыі circRNA | Праектаванне і аптымізацыя кодуючых паследавательнасцей | Аптымізацыя кодонавай паследавательнасці CDS | 1 |
Праектаванне і аптымізацыя не кодуючых паследавательнасцей | Дызайн і аптымізацыя інтранаў, экзонав, гамалогічных рукаваў і спейсара | 1-2 | |
Падготовка цыркуляванага плазміда | Сінтэз гена | Сінтэз гена (Трэція сторона) | 7-10 |
Ампліфікацыя плазміда | Ампліфікацыя плазміда | 2 | |
Выдзеленне плазміда | |||
Падготовка лінейнага плазміда | Лінейрызацыя і чысценне плазмід | Лінеарызацыя плазміда | 1 |
Чыстка ДНК пасля лінеарызацыі | |||
Транскрыпцыя in vitro і цыклізацыя | Транскрыпцыя in vitro і цыклізацыя | Рэакцыі транскрыпцыі in vitro і цыклізацыі | 1-2 |
Паўтрыненне RNase R | |||
Аптымізацыя — неабходна | Кампаненты реакцыі, аптымізацыя часу | 2-5 | |
чыстка circRNA | Традыцыйны спосаб чысціць | Адкладванне хлоракам літава | 1 |
Чысціць магнітнымі бусінкамі | 1 | ||
Выsoкачыстая чысціння circRNA | Падготавальны высокапасцовая расточальная хроматографія (HPLC) | 1-2 | |
Змена буфара | Ультрафільтрацыя | 1 | |
ліофілізацыя circRNA | Прыкладны запаўненне | Напаўнік | 2-3 |
Ліофілізацыя | Папярэдняя заморозка | ||
Першае сушэнне (сублімацыя) | |||
Другая сушка (дезабсорцыя) | |||
энкапсуляцыя circRNA-LNP | Энкапсуляцыя LNP | Папярэдняя падгатовка матэрыялаў і раствараў | 2 |
Мікrafлюіднае міксаванне прылад | |||
Змена буфара | Тангенцальная прамый фільтрацыі | 1 | |
Стэрылізаваць | Фільтрацыя | ||
Кантроль якасці плазміднай ДНК | Канцэнтрацыя\/чыстата | Ультрафіолетавая (UV) спектрафотаметрыя | 1-2 |
Канфігурацыя плазміда | Электрафарэза ў агарасавай гелю (AGE) | ||
Капілярны электрафарэз (CE)-додатковы | |||
Адыдэнтыфікацыя плазміда | Ідэнтыфікацыя рэстрацыйных энзымоў\/AGE | ||
Кантроль якасці circRNA | Канцэнтрацыя\/чыстата | Ультрафіолетавая (UV) спектрафотаметрыя | - |
Чыстасьць | Электрафарэз у агарасавай гелі (AGE)\/E-Gel | 0.5 | |
Високамерная ліквідная хроматаграфія-додатковы | 1 | ||
Кантроль якасці circRNA-LNP | Эфектыўнасць энкапсуляцыі | Метад RiboGreen | 1 |
Размер чаліка | Дынамічнае літаскае розсіяванне (DLS) | 1 | |
Індэкс полідысперсіі | Дынамічнае літаскае розсіяванне (DLS) | 1 | |
Зета-патаенцыял | Дынамічнае літаскае розсіяванне (DLS) | 1 | |
Асай патэнцыі на клетках | Трансфекцыя клетак | Пластаванне клетак, трансфекцыя клетак | 4 |
Вылучэнне цэлевага белка | Наблюдение за флуоресцэнтнасцю, Заход Уэстэрн-блат/ELISA | 1-3 |
Мы трансфірувалі цыклічны РНК з падвышанай зеленай флуоресцэнтнай беліной (eGFP circRNA), mCherry circRNA, люцыферазны circRNA ў клеткі 293T, і выяўлялі цэлевую беліну праз флуорэсцэнтны, сьвятлотый или кольерытны сигнал, заход Уэстэрн-блат (WB), імунна-ферментны аналіз (ELISA).
Асымптотычныя даследаванні эфектыўнасці цыклічных РНК на клеткавай базе ад Yaohai Bio-Pharma