У мэтцы падгатовкі пачатковых RNA, часта выкарыстоўваецца метад транскрыпцыі in vitro (IVT). Реакцыя IVT выкарыстоўвае лінейную плазмідную DNA, якая ўключает проматар T7 як шаблон і синтэзіруе пачатковы RNA з нуклеазідных трифосфат (NTP) як субstrate ў наяўнасці T7 RNA полімеразы.
Метады ін вітро цыклізацыі ўключаюць хімічнае злучэнне, энзыматычнае злучэнне і метад перамешанага інтрана-экзона (PIE). Хімічнае злучэнне і энзыматычнае злучэнне падыходзяць для цыклізацыі кароткіх РНК. Колі фрагмент больш за 100 нт, швидкасць цыклізацыі значна спадзе. У супрацоўнасці з гэтым, метад нуклеазы, які заснаваны на сістэме PIE, можа дасягнуць цыклізацыі паслядоўнасцей да 8 кб.
Пад каталізаваннем гуанозын-трыйфосфата (GTP) структура PIE праходзіць цыклізацыю экстра-інтранных паслядоўнасцей. Злучана з разумнымі стратэгіямі для павелічэння швидкасці цыклізацыі, Yaohai Bio-Pharma можа дасягнуць цыклізацыі паслядоўнасцей да 4 кб, з аперацыйнасцю цыклізацыі больш за 80%.
Реакцыя ін вітро цыклізацыі РНК працягваецца наступным чынам:
Папереднік РНК сінтэзіруецца штучнай транскрыпцыяй, і компанент PIE завяршае самазлучэнне пад каталізаваннем GTP, каб утворыць circRNA.
Дэталі служб
| ПРОЦЕС |
Дэталі сервісу |
Тэрмін выканання (робальны дзень) |
| Транскрыпцыя і цыркуляцыя вітка ў асаблівасцях |
Падтвесць сістэмы реакцыі |
1-2 |
| Рэакцыі транскрыпцыі in vitro і цыклізацыі |
| Паўтрыненне RNase R |
| Аптымізацыя рэакцыі |
Кампаненты реакцыі, аптымізацыя часу |
2-5 |
Нашы харастыкі
- Строгае тэsts design і аптымізацыя
Можна дасягнуць цыклізацыі РНК да 4 кб.
- Высокая эфектыўнасць цыклізацыі
Чырэз разумную стратэгію аптымізацыі парадка можна дасяgnuць ступень цыклізацыі больш за 80%.
Дзеяннем стрыглага кантролю RNases ў эксперыментальнай сродовіне і пад выкараннем, эфектыўна папярэштаецца дэгрэдацыя RNA.
Прыклад даследвання
Цыклізацыя і абагашчэнне circRNA in vitro
На базе сістэмы PIE кампанія Yaohai Bio-Pharma аптымізавала секвенцыю circRNA, з цыклізацыйнай часткай больш за 80% па рэзультаце агараўай гелевай электрафарэзы (AGE). Выкарыстоўваючы RNase R для абагашчэння circRNA, рэзультаты E-gel электрафарэзы паказваюць, што лінейны RNA-прадкацэсар перавараны, і пасля даўнейшай чыстацы большасць цыклізаваных circRNA з незамкнутымі разрываімі можна ўдаліць. Раствор для чыстацы розроблены самастойна кампаніяй Yaohai Bio-Pharma.
Цыклізацыя і абагашчэнне circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
