Што тычыцца масавай вытворчасці мРНК, транскрыпцыя in vitro (IVT) з'яўляецца больш эфектыўным і сталым метадам. Рэакцыя IVT прымае лінеарызаваную плазмідную ДНК, якая змяшчае промотор Т7, у якасці матрыцы, і мРНК сінтэзуецца з нуклеозидтрифосфатами (NTP) у якасці субстратаў у прысутнасці РНК-палімеразы Т7.
Нуклеатыдная мадыфікацыя - гэта прарыў у вывучэнні мРНК, дзе немадыфікаваныя малекулы мРНК распазнаюцца ўнутрыклеткавымі датчыкамі РНК для актывацыі прыроджанага імунітэту. Для меркаванняў імунагеннасці мРНК in vivo і эфектыўнасці трансляцыі ў працэсе IVT звычайна выкарыстоўваюцца пэўныя тыпы мадыфікаваных NTP, а распаўсюджанымі мадыфікаванымі нуклеатыдамі з'яўляюцца псеўдаурыдын (Ψ), N1-пазначаў-псеўдаурыдын (N1Ψ) і 5-метылцытазін (5mC).
Працэс транскрыпцыі мРНК in vitro
Дыяграма рэакцыі транскрыпцыі in vitro (IVT).
Падрабязнасці паслуг
Дадатковая паслуга |
Падрабязнасці аб паслузе |
Перыяд дастаўкі (рабочы дзень) |
Транскрыпцыя in vitro (IVT) |
IVT, транскрыпцыя in vitro |
1 |
| Мадыфікацыі нуклеатыдаў (Ψ/N1Ψ/5mC і г.д.) |
| Выдаленне шаблону ДНК (DNase I) |
Аптымізацыя стану IVT - неабавязкова |
Праектаванне і аптымізацыя кампанентаў рэакцыі IVT |
2-5 |
нашы Асаблівасці
- Разнастайныя стратэгіі мадыфікацыі нуклеатыдаў
Палепшыць стабільнасць мРНК і экспрэсію бялку in vivo.
- Строгі дызайн і аптымізацыя тэстаў
Можа быць дасягнута падрыхтоўка фрагмента мРНК памерам да 10 кб.
Дзякуючы аптымізацыі ўмоў рэакцыі IVT хуткасць транскрыпцыі дасягае 1:200.
Строгі кантроль РНКазы з дапамогай эксперыментальнага асяроддзя і расходных матэрыялаў можа эфектыўна прадухіліць дэградацыю мРНК.
Case Study
Сучасная сістэма рэакцыі IVT прыкладна аптымізавана для сінтэтычных сістэм даўжынёй каля 100 нт, а не для мРНК адвольнай даўжыні. Чым даўжэй паслядоўнасць мРНК, тым цяжэй яе транскрыбаваць і тым больш яна схільная дэградацыі.
Каб падрыхтаваць індывідуальныя паслядоўнасці мРНК даўжынёй каля 10 кб, Yaohai Bio-Pharma паспяхова падрыхтавала высакаякасныя ўзоры з высокім стаўленнем транскрыпцыі 1:135 і атрымала 135 мкг першапачаткова ачышчаных прадуктаў мРНК пасля 1 мкг лінеарызаванай плазміды. быў транскрыбаваны in vitro з дапамогай строгага эксперыментальнага дызайну, пастаяннай аптымізацыі ўмоў рэакцыі і строгага кантролю РНКазы.
Ідэнтыфікацыя мРНК (электрафарэз у агарозным гелі)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
