У звязку з масавым вытворам mRNA, транскрыпцыя in vitro (IVT) яляецца больш афіцыйным і даскональным спосабам. У IVT-рэакцыі выкарыстоўваецца лінейны плазмідная DNA, якая ўключае проматар T7, як шаблон, і mRNA сінтэтыруецца з нуклеазідных трифосфатоў (NTPs) як субстратаў у наяўнасці полімеразы RNA T7.
Мадыфікацыя нуклеатыдаў яляецца перамогай ў даследванні mRNA, дзе немадыфікаваныя молекулы mRNA распаўнічаюцца клеткавымі сенсарамі RNA для актывізацыі уладжанай імуннасці. Дзеля разгледжання імунагеннай адмоўнасці mRNA ў живой сістэме і эфектыўнасці транслатацыі, процес IVT звычайна выкарыстоўвае пэўныя тыпы мадыфікаваных NTPs, і часта мадыфікаваныя нуклеатыды — гэта псевдуюрыдыны (Ψ), N1-метыл-псевдуюрыдына (N1Ψ) і 5-метылцытозін (5mC).
Процес вітрынальнай транскрыпцыі mRNA
Дыяграма реакцыі вітрынальнай транскрыпцыі (IVT)
Дэталі служб
Апцыянальная служба |
Дэталі сервісу |
Тэрмін выканання (робальны дзень) |
Транскрыпцыя вонкаштоўна (IVT) |
IVT, Вітрынальная транскрыпцыя |
1 |
| Модыфікацыі нуклеатадаў (Ψ/Н1Ψ/5мC і т.д.) |
| Выдаленне ДНК-шаблона (ДНаза I) |
Аптымізацыя умоваў IVT - неабходна |
Прынцыпы і аптымізацыя дэзайн компанентаў реакцыі IVT |
2-5 |
Нашы харастыкі
- Змешаныя стратэгіі нуклеатаднай модыфікацыі
Павышэнне стаяласці mRNA і экспрэсіі белка ў живым організме.
- Строгае тэsts design і аптымізацыя
магчымая падготовка фрагмента mRNA да 10kb.
За счёт аптымізацыі ўмоваў реакцыі IVT, швиддасьць транскрыпцыі дасягае 1:200.
Строгае кантроліраванне RNase праз експерыментальную сяродовіну і патрыбныя вешчыцы можа эфектыўна спарыць дэградацыю mRNA.
Прыклад даследвання
Бягучая система реакцыі IVT у агульным лічыцца аптымізаванай для сінтэтычных сістэм з даўжынёй прымята 100 нт, не для mRNA адвольнай даўжыні. Чым дылшэйшая mRNA-послядоўнасць, тым складзейшая яе транскрыпцыя і чым большая ў яе выразнасць дэградацыі.
Для падготовкі замавных mRNA-послядоўнасцей з даўжынёй прымята 10 кб, Yaohai Bio-Pharma паспяхова падгатавала выхавалыя пробы з высокаю транскрыпцыйнай адносінай 1:135 і атрымала 135 μg початкова ачысценых mRNA-вырабоў пасля транскрыпцыі 1 μg лінейнага плазмыда ў vitro праз строгую експерыментальнай дэзайн, непрыстанную аптымізацыю умоваў реакцыі і строгае кантроліраванне RNase.
аднаходзіць mRNA (Агаравая гелевая электрафарэз)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
