Аналіз сайтаў N-гліказілявання мае вырашальнае значэнне для разумення функцый гліканаў. Yaohai Bio-Pharma выкарыстоўвае вадкасную храматаграфію-мас-спектраметрыю (LC-MS) пасля ферментатыўнага расшчаплення для сайта N-гліказілявання.
Мы ўдзельнічалі ў структурнай характарыстыкі бялку розных вялікіх малекул, у тым ліку рэкамбінантных субадзінак вакцын, нанацелаў/VHH/аднадоменных антыцелаў (sdAbs), фрагментаў антыцелаў, гармонаў/пептыдаў, цітакінаў, фактараў росту (GF), ферментаў, калагенаў, г.д.
Нарматыўныя патрабаванні да сайта N-гліказілявання
Згодна з рэкамендацыямі ICH Q6B, «для глікапратэінаў вызначаецца ўтрыманне вугляводаў (нейтральных цукроў, амінацукроў і сіялавых кіслот). Акрамя таго, у максімальна магчымай ступені аналізуюцца структура вугляводных ланцугоў, алігацукрыдны малюнак (вусікавы профіль) і сайт(ы) гліказілявання поліпептыднага ланцуга.
Аналітычны метад
Аналіз |
Методыка |
Сайт N-гліказілявання |
Вадкасная храматаграфія-мас-спектраметрыя (LC-MS) пасля ферментатыўнага расшчаплення |
Працэдуры
1. Ферментатыўнае расшчапленне бялку з дапамогай трыпсінаў або іншай протеазы
2. Асобны фрагмент глікапептыдаў
3. Пацвердзіце месца N-гліказілявання метадам ВХ-МС
4. Аналіз дадзеных