ข้อมูลการแผนที่เปปไทด์ด้วยเทคนิคโครมาโทกราฟีของเหลว-สเปกโตรมิเตอร์มวล (LC-MS) จะให้ข้อมูลจำนวนมากเกี่ยวกับโครงสร้างระดับต้นและระดับสูงของโปรตีนพื้นฐานและโปรตีนที่ถูกผลิตใหม่ รวมถึงการครอบคลุมลำดับกรดอะมิโน การเปลี่ยนแปลงหลังการแปลรหัสพันธุกรรม (PTMs เช่น การกลูโคซิเลชัน การออกซิเดชัน การดีอามิเดชัน) พันธะไดสวัลไฟด์ เป็นต้น
ยาไฮ ไบโอ-ฟาร์มา ให้บริการวิเคราะห์การแผนที่เปปไทด์สำหรับโปรตีนเป้าหมายของคุณโดยใช้ LC-MS เพื่อเร่งกระบวนการวิจัยเกี่ยวกับโครงสร้างโปรตีนของคุณ
เราได้มีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ลักษณะโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่หลายชนิด เช่น วัคซีนย่อยที่ถูกผลิตใหม่ นาโนบอดี้/VHHs/แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs) ชิ้นส่วนแอนติบอดี ฮอร์โมน/เปปไทด์ ไซโตไคน์ แฟคเตอร์การเจริญเติบโต (GF) เอนไซม์ คอลลาเจน เป็นต้น
ข้อกำหนดทางกฎระเบียบสำหรับการแผนที่เปปไทด์
ICHQ6B แนะนำว่า "การแยกสลายผลิตภัณฑ์เป็นเพปไทด์ที่ชัดเจนจะดำเนินการโดยใช้เอนไซม์หรือสารเคมีที่เหมาะสม และเพปไทด์ที่เกิดขึ้นจะถูกวิเคราะห์ด้วย HPLC หรือวิธีการวิเคราะห์อื่นที่เหมาะสม เพปไทด์ควรได้รับการระบุให้มากที่สุดเท่าที่จะทำได้ โดยใช้วิธีการ เช่น การวิเคราะห์องค์ประกอบกรดอะมิโน การลำดับ N-terminal หรือการวิเคราะห์ด้วยมวล (MS) การสร้างแผนที่เพปไทด์ของสารออกฤทธิ์หรือผลิตภัณฑ์ยา (DP) โดยใช้วิธีที่ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องอย่างเหมาะสม เป็นวิธีที่มักใช้เพื่อยืนยันโครงสร้างของผลิตภัณฑ์ตามต้องการสำหรับการปล่อยแบทช์"
วิธีการทางการวิเคราะห์
| การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
| การแมปเปปไทด์ |
การย่อยโปรตีนด้วยโปรเตอเลสและการโครมาโตกราฟีแบบของเหลว-การวิเคราะห์ด้วยมวล (LC-MS) |
ขั้นตอนการวิเคราะห์
1. การลดและแอลกิเลชัน
วัตถุประสงค์คือการลดสะพานดิสัลไฟด์และปิดกั้นไทโอลที่เกิดขึ้น การลดสะพานดิสัลไฟด์ช่วยเปิดโครงสร้างโปรตีน ซึ่งทำให้กระบวนการย่อยโปรตีนด้วยเอนไซม์มีประสิทธิภาพมากขึ้น นอกจากนี้ขั้นตอนนี้ยังจะทำลายสะพานระหว่างสายในกรณีของโปรตีนหลายสายที่มีสะพานดิสัลไฟด์เชื่อมโยงสายเข้าด้วยกัน (เช่น แอนติบอดีโมโนคลอแนล, mAbs)
2. การย่อยโปรตีนโดยใช้เอนไซม์
วัตถุประสงค์คือการทำให้โปรตีนแตกเป็นเพปไทด์ เราเลือกเอนไซม์ตามลำดับทฤษฎีของโปรตีนและความรู้เกี่ยวกับการย่อยโปรตีนด้วยเอนไซม์ทางทฤษฎี การเลือกเอนไซม์ในลักษณะนี้ควรจะให้ผลการวิเคราะห์แผนที่เพปไทด์ที่ดีที่สุด
3. การวิเคราะห์เพปไทด์ที่ถูกย่อยแล้ว ใช้โครมาโทกราฟีของเหลวความเร็วสูงแบบเฟสกลับพร้อมการตรวจจับด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) และการตรวจจับด้วยแมสสเปกโตรเมตรีแบบอิเล็กโทรสเปรย์ (LC/ES-MS)
การแยกเพปไทด์ตามความขั้วโดยใช้ LC (reverse phase-LC)
เมื่อพีปไทด์ระเหยออกจากคอลัมน์ LC เครื่อง质สเปกโตรมิเตอร์จะสร้างข้อมูลมวลร่วมกับข้อมูลไอออนเศษซาก ซึ่งช่วยให้เราสามารถกำหนดข้อมูลลำดับได้ เราใช้ข้อมูลลำดับเพื่อยืนยันตัวตนของพีปไทด์และให้ข้อมูลเบื้องต้น
นอกจากนี้เรายังสามารถสร้างข้อมูลการแตกตัวจากพีปไทด์เมื่อพวกมันเข้าสู่แหล่งกำเนิดของเครื่อง质สเปกโตรมิเตอร์จากคอลัมน์ LC ขึ้นอยู่กับความต้องการของการศึกษา อาจเป็น LC-MS/MS แบบเฉพาะเจาะจงหรือไม่เฉพาะเจาะจง ซึ่งสามารถถือว่าเป็นรูปแบบหนึ่งของ MS ที่ทำงานร่วมกัน
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
