ข้อมูลการทำแผนที่เปปไทด์ที่ใช้โครมาโตกราฟีของเหลว-แมสสเปกโตรเมทรี (LC-MS) เป็นหลักจะให้ข้อมูลปริมาณมากเกี่ยวกับโครงสร้างลำดับปฐมภูมิและลำดับที่สูงกว่าของโปรตีนพื้นเมืองและรีคอมบิแนนท์ รวมถึงการครอบคลุมลำดับกรดอะมิโน การดัดแปลงหลังการแปลความหมาย (PTM เช่น ไกลโคซิเลชัน) , ออกซิเดชัน, ดีอะมิเดชัน), พันธะไดซัลไฟด์ ฯลฯ
Yaohai Bio-Pharma ให้บริการวิเคราะห์การทำแผนที่เปปไทด์สำหรับโปรตีนเป้าหมายของคุณโดย LC-MS เพื่อเร่งการวิจัยเกี่ยวกับโครงสร้างโปรตีนของคุณ
เรามีส่วนร่วมในการระบุลักษณะโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่ต่างๆ รวมถึงวัคซีนหน่วยย่อยชนิดรีคอมบิแนนท์ นาโนบอดี/VHHs/ แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs) ชิ้นส่วนแอนติบอดี ฮอร์โมน/เปปไทด์ ไซโตไคน์ ปัจจัยการเจริญเติบโต (GF) เอนไซม์ คอลลาเจน ฯลฯ
ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบสำหรับการทำแผนที่เปปไทด์
แนวทางปฏิบัติของ ICHQ6B แนะนำว่า “การแบ่งส่วนผลิตภัณฑ์แบบเลือกสรรให้เป็นเปปไทด์ที่แยกกันจะดำเนินการโดยใช้เอนไซม์หรือสารเคมีที่เหมาะสม และชิ้นส่วนเปปไทด์ที่เป็นผลลัพธ์จะได้รับการวิเคราะห์โดย HPLC หรือขั้นตอนการวิเคราะห์อื่นๆ ที่เหมาะสม ควรระบุชิ้นส่วนเปปไทด์ให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้โดยใช้เทคนิค เช่น การวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดอะมิโน การหาลำดับที่ปลาย N หรือแมสสเปกโตรเมทรี (MS) การทำแผนที่เปปไทด์ของสารออกฤทธิ์หรือผลิตภัณฑ์ยา (DP) โดยใช้วิธีการตรวจสอบความถูกต้องอย่างเหมาะสมเป็นวิธีการที่มักใช้เพื่อยืนยันโครงสร้างผลิตภัณฑ์ที่ต้องการสำหรับการปล่อยเป็นชุด”
วิธีการวิเคราะห์
| การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
| การทำแผนที่เปปไทด์ |
การย่อยโปรตีเอสและโครมาโตกราฟีของเหลว-แมสสเปกโตรเมทรี (LC-MS) |
ขั้นตอนการวิเคราะห์
1. การรีดิวซ์และอัลคิเลชัน
จุดประสงค์คือเพื่อลดบริดจ์ไดซัลไฟด์และปิดกั้นไทออลอิสระที่สร้างขึ้น การลดสะพานไดซัลไฟด์ช่วยเปิดโครงสร้างโปรตีนซึ่งทำให้การย่อยโปรตีนมีประสิทธิภาพมากขึ้น ขั้นตอนนี้จะทำลายสะพานเชื่อมระหว่างสายโซ่ในกรณีของโปรตีนหลายสายโซ่ซึ่งมีสะพานไดซัลไฟด์ที่เชื่อมสายโซ่ (เช่น โมโนโคลนอลแอนติบอดี，mAbs)
2. การย่อยโปรตีนโดยใช้เอนไซม์
จุดประสงค์คือเพื่อแยกโปรตีนออกเป็นเปปไทด์ เราเลือกเอนไซม์ตามลำดับทางทฤษฎีของโปรตีนและความรู้เกี่ยวกับการย่อยโปรตีนตามทฤษฎีด้วยเอนไซม์ การเลือกเอนไซม์ในลักษณะนี้น่าจะส่งผลให้การวิเคราะห์แผนที่เปปไทด์ได้ดีที่สุด
3. การวิเคราะห์เปปไทด์ที่ถูกย่อย การใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบย้อนกลับเฟสแบบออนไลน์พร้อมการตรวจจับด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) และสเปรย์ด้วยไฟฟ้า-แมสสเปกโตรเมทริก (LC/ES-MS)
การแยกเปปไทด์ตามขั้วโดยใช้ LC (เฟสย้อนกลับ-LC)
ขณะที่เปปไทด์หลุดออกจากคอลัมน์ LC แมสสเปกโตรมิเตอร์จะสร้างข้อมูลมวลร่วมกับข้อมูลไอออนของแฟรกเมนต์ ซึ่งช่วยให้เราสามารถระบุข้อมูลลำดับได้ เราใช้ข้อมูลลำดับเพื่อยืนยันตัวตนของเปปไทด์และให้ข้อมูลหลัก
นอกจากนี้เรายังสามารถสร้างข้อมูลการกระจายตัวของเปปไทด์เมื่อเข้าสู่แหล่งแมสสเปกโตรมิเตอร์จากคอลัมน์ LC ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับข้อกำหนดของการศึกษา นี่เป็น LC-MS/MS แบบเลือกหรือไม่เลือกก็ได้ ซึ่งถือได้ว่าเป็นรูปแบบของ Tandem MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
