การวิเคราะห์ตำแหน่ง N-Glycosylation มีความสำคัญต่อการเข้าใจการทำงานของไกลโคไซต์ ยาไฮ ไบโอ-ฟาร์มา ใช้เทคนิค Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) หลังจากการตัดด้วยเอนไซม์เพื่อตรวจสอบตำแหน่ง N-Glycosylation
เราได้มีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ลักษณะโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่หลายชนิด เช่น วัคซีนย่อยที่ถูกผลิตใหม่ นาโนบอดี้/VHHs/แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs) ชิ้นส่วนแอนติบอดี ฮอร์โมน/เปปไทด์ ไซโตไคน์ แฟคเตอร์การเจริญเติบโต (GF) เอนไซม์ คอลลาเจน เป็นต้น
ข้อกำหนดทางกฎระเบียบสำหรับตำแหน่ง N-Glycosylation
ตามแนวทาง ICH Q6B “สำหรับไกลโคโปรตีน จะทำการวัดปริมาณคาร์โบไฮเดรต (น้ำตาลกลาง, น้ำตาลอามิโน และซาเลียคแอซิด) นอกจากนี้ยังจะวิเคราะห์โครงสร้างของโซ่คาร์โบไฮเดรต, รูปแบบโอลิโกแซคคาไรด์ (antennary profile) และตำแหน่งของการไกลโคไซเลชันของสายพอลิเพปไทด์ให้มากที่สุดเท่าที่จะทำได้
วิธีการทางเคมีวิเคราะห์
การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
ไซต์ N-Glycosylation |
โครมาโทกราฟีของเหลว-สเปกโตรมิเตอร์มวล (LC-MS) หลังจากการตัดด้วยเอนไซม์ |
ขั้นตอน
1. การย่อยโปรตีนด้วยเอนไซม์ทริปซินหรือโปรตีเอสชนิดอื่น
2. 分离กลูโคโปรตีนAGMENT
3. ยืนยันตำแหน่ง N-ไกลโคซิเลชันโดย LC-MS
4. วิเคราะห์ข้อมูล