การครอบครองไซต์ N-glycosylation เป็นคุณลักษณะทางสรีรวิทยาของไกลโคโปรตีนและผลิต N-glycan โดยส่วนใหญ่ บริการวิเคราะห์การครอบครองไซต์ N-glycosylation จาก Yaohai Bio-Pharma ดำเนินการผ่านกระบวนการย่อยสลาย การปลดปล่อย การเสริมความเข้มข้น และการวิเคราะห์โดยใช้เทคนิคลิควิดโครมาโทกราฟี-ไอเล็กโตรสเปรย์ไอออนเนชันแมสสเปกโตรเมตรี-แมสสเปกโตรเมตรี (LC-ESI-MS/MS)
เราได้มีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ลักษณะโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่หลายชนิด เช่น วัคซีนย่อยที่ถูกผลิตใหม่ นาโนบอดี้/VHHs/แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs) ชิ้นส่วนแอนติบอดี ฮอร์โมน/เปปไทด์ ไซโตไคน์ แฟคเตอร์การเจริญเติบโต (GF) เอนไซม์ คอลลาเจน เป็นต้น
ข้อกำหนดทางกฎระเบียบสำหรับการครอบครองไซต์ N-glycosylation
ตามแนวทาง ICH Q6B “สำหรับไกลโคโปรตีน ปริมาณคาร์โบไฮเดรต (น้ำตาลกลาง น้ำตาลอามิโน และกรดไซอาลิก) จะถูกกำหนด นอกจากนี้โครงสร้างของโซ่คาร์โบไฮเดรต รูปแบบโอลิโกแซคคาไรด์ (โปรไฟล์แอนเทนนา) และตำแหน่งการไกลโคซิเลชันของสายพอลิเพปไทด์จะถูกวิเคราะห์ให้มากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้”
วิธีการทางเคมีวิเคราะห์
| การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
| การครอบครองไซต์ N-glycosylation |
LC-MS หลังจากการย่อยด้วยเอนไซม์ deglycosylase และ protease |
ขั้นตอน
1. การย่อยโปรตีนเพื่อสร้างเศษเพปไทด์ขนาดเล็ก
2. การปลดปล่อย N-ไกลคานโดยใช้เอนโดไกลโคไซด์ H หรือ PNGase F เอนโดไกลโคไซด์ H ตัดพันธะระหว่างสองโมเลกุล GlcNAc ในแกนของไกลคานที่เชื่อมโยงกับ N ส่วน PNGase F เป็นกลีโคอามิดาสที่ตัดพันธะระหว่าง GlcNAc และ Asn ปลดโซ่คาร์โบไฮเดรตออกทั้งหมดและเปลี่ยน Asn เป็น Asp โดยเพิ่มน้ำหนักขึ้น 1-Da
3. การเสริม N-ไกลโคเพปไทด์ผ่าน HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. การวิเคราะห์ความหนาแน่นของไซต์ไกลโคซิเลชันที่เชื่อมโยงกับ N โดยใช้ LC-ESI-MS/MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
