โปรตีนรีคอมบิแนนท์มักจะเห็นการเกิดออกซิเดชันของสายด้านข้างของกรดอะมิโนที่ถูกเปิดเผย เช่น ทริปโตเฟน (Trp) และเมไทโอนีน (Met) ซึ่งเปลี่ยนคุณสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ของโปรตีน การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้อาจมีส่วนทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงการทำงานทางชีวภาพของโปรตีนที่ได้รับผลกระทบ เช่น การสูญเสียการจับกัน กิจกรรมของเอนไซม์ลดลง การชำระล้างอย่างรวดเร็วโดยไม่คาดคิด โปรตีนเป็นเป้าหมายสำคัญของปฏิกิริยาออกซิเดชั่นเนื่องจากทำปฏิกิริยาอย่างรวดเร็วกับสารออกซิแดนท์และมีมากในเซลล์ เนื้อเยื่อนอกเซลล์ และของเหลวในร่างกาย
ดังนั้นการติดตามการเกิดออกซิเดชันของโปรตีนจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการพัฒนาชีวเภสัชภัณฑ์ที่ประสบความสำเร็จ
Yaohai Bio-Pharma นำเสนอบริการวิเคราะห์ออกซิเดชันของกรดอะมิโน ซึ่งช่วยให้คุณสามารถระบุการเกิดออกซิเดชันของกรดอะมิโนด้วย Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS)
เรามีส่วนร่วมในการระบุลักษณะโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่ต่างๆ รวมถึงวัคซีนหน่วยย่อยรีคอมบิแนนท์ นาโนบอดี/ VHHs/ แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs) ชิ้นส่วนแอนติบอดี ฮอร์โมน/เปปไทด์ ไซโตไคน์ ปัจจัยการเจริญเติบโต (GF) เอนไซม์ คอลลาเจน ฯลฯ
ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบสำหรับการเกิดออกซิเดชันของกรดอะมิโน
ตามแนวทาง ICH Q6B รูปแบบออกซิไดซ์อาจถูกตรวจพบและแสดงคุณลักษณะโดยวิธีโครมาโทกราฟี อิเล็กโตรโฟเรติก และ/หรือวิธีการวิเคราะห์อื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง (เช่น โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) อิเล็กโตรโฟรีซิสของคาปิลลารี แมสสเปกโทรสโกปี ไดโครอิซึมแบบวงกลม)
วิธีการวิเคราะห์
การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
ออกซิเดชันของกรดอะมิโน |
LC-MS, โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบ Reversed-Phase (RP-HPLC) หรือโครมาโตกราฟีแบบปฏิกิริยาชอบน้ำ โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HIC-HPLC) และแมสสเปกโตรเมตรี |
ขั้นตอนการวิเคราะห์
1. การเตรียมตัวอย่าง
2. LC-MS
3 การวิเคราะห์ข้อมูล
สารตกค้างของทริปโตเฟน (Trp) มีแนวโน้มที่จะเกิดออกซิเดชันเป็นพิเศษ เนื่องจากมีปฏิกิริยาสูงของอินโดลอะโรมาติกกับออกซิเจนชนิดที่เกิดปฏิกิริยา ออกซิเดชันของ Trp ต้องมีการสัมผัสกับสารตกค้างของ Trp ซึ่งโดยปกติจะถูกฝังอยู่ในโครงสร้างสามมิติของโปรตีน
อย่างไรก็ตาม เมื่อสารตกค้างของ Trp ถูกออกซิไดซ์ พวกมันสามารถเปลี่ยนรูปเป็นผลิตภัณฑ์ได้หลากหลายโดยมีคุณสมบัติแตกต่างจาก Trp ดั้งเดิมอย่างมาก วิถีทางที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการเกิดออกซิเดชันของ Trp รวมถึงการก่อตัวของ N-formylkinurenine (ความแตกต่างของมวล: +32)
กรดอะมิโนที่ถูกออกซิไดซ์ทั่วไปอีกชนิดหนึ่งคือเมไทโอนีน อะตอมของกำมะถันในสารตกค้าง Met สามารถรับออกซิเจนหนึ่งหรือสองอะตอมที่ทำให้เกิดซัลฟอกไซด์ (ผลต่างมวล: +16) หรือซัลโฟน (ผลต่างมวล: +32) ตามลำดับ การปรับเปลี่ยนนี้ค่อนข้างจะพบได้บ่อยเนื่องจากการสัมผัสกับพื้นผิวของ Met ที่สูง