การครอบครองไซต์ N-glycosylation เป็นคุณลักษณะทางสรีรวิทยาของไกลโคโปรตีนและส่วนใหญ่ผลิต N-glycan บริการวิเคราะห์การใช้ N-glycosylation ของ Yaohai Bio-Pharma ดำเนินการผ่านการย่อย การปล่อย การเพิ่มคุณค่า และการวิเคราะห์โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลว-อิออนไนเซชันแมสสเปกโตรเมทรี-แมสสเปกโตรเมทรี (LC-ESI-MS/MS)
เรามีส่วนร่วมในการระบุลักษณะโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่ต่างๆ รวมถึงวัคซีนหน่วยย่อยชนิดรีคอมบิแนนท์ นาโนบอดี/VHHs/ แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs) ชิ้นส่วนแอนติบอดี ฮอร์โมน/เปปไทด์ ไซโตไคน์ ปัจจัยการเจริญเติบโต (GF) เอนไซม์ คอลลาเจน ฯลฯ
ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบสำหรับการเข้าใช้ไซต์ N-glycosylation
ตามแนวทางของ ICH Q6B “สำหรับไกลโคโปรตีน ปริมาณคาร์โบไฮเดรต (น้ำตาลที่เป็นกลาง น้ำตาลอะมิโน และกรดเซียลิก) จะถูกกำหนด นอกจากนี้ โครงสร้างของสายโซ่คาร์โบไฮเดรต รูปแบบโอลิโกแซ็กคาไรด์ (โปรไฟล์เสาอากาศ) และตำแหน่งไกลโคซิเลชันของสายโซ่โพลีเปปไทด์ ได้รับการวิเคราะห์ในระดับที่ดีที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้”
วิธีวิเคราะห์
| การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
| อัตราการเข้าพักของไซต์ N-glycosylation |
LC-MS หลังจากการย่อยดีไกลโคซิเลสและโปรตีเอส |
ขั้นตอนการ
1. การย่อยโปรตีนของโปรตีนเพื่อสร้างชิ้นส่วนเปปไทด์ขนาดเล็ก
2. การปลดปล่อย N-glycan โดยใช้ endoglycosidase H หรือ PNGase F. Endoglycosidase H จะตัดพันธะระหว่าง GlcNAc ที่ตกค้างในแกนกลางของ glycans ที่เชื่อมโยงกับ N ในขณะที่ PNGase F คือ glycoamidase ที่ตัดพันธะระหว่าง GlcNAc และ Asn ซึ่งปลดปล่อยทั้งมวล ห่วงโซ่น้ำตาลและการแปลง Asn เป็น Asp ด้วยมวลที่เพิ่มขึ้น 1-Da
3. การเพิ่มคุณค่า N-ไกลโคเปปไทด์ด้วย HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. การวิเคราะห์การครอบครองไซต์ไกลโคซิเลชันที่เชื่อมโยงกับ N โดยใช้ LC-ESI-MS/MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
