ความสำคัญของการพัฒนากระบวนการทางท้ายน้ำ
กระบวนการท้ายน้ำ (USP) หรือที่เรียกว่ากระบวนการหมัก เป็นหนึ่งในขั้นตอนแรกของการประมวลผลชีวภาพท้ายน้ำ การหมักจุลชีพมีความสำคัญต่อการเพาะเลี้ยงเซลล์ความหนาแน่นสูงและการแสดงออกของยีนต่างถิ่น ซึ่งส่งผลกระทบโดยตรงต่อผลผลิตและความคุ้มค่าของผลิตภัณฑ์ชีวภาพ
ในช่วงต้นของการพัฒนาผลิตภัณฑ์ชีวภาพ (ก่อนคลินิกหรือระยะที่ 1/2) จุดเน้นคือการพัฒนากระบวนการที่ไม่มีส่วนประกอบจากสัตว์ที่สามารถขยายขนาดได้ โดยมีผลผลิตระดับกลางและปฏิบัติตามมาตรฐานคุณภาพของผลิตภัณฑ์ทั้งหมด
เมื่ออยู่ในช่วงปลาย (เฟส 3 หรือเชิงพาณิชย์) เราจะเน้นไปที่ผลผลิต ความทนทาน ความสามารถในการขยายขนาด และความสามารถในการทำซ้ำ เพื่อสร้างกระบวนการที่มีต้นทุนต่ำ กิจกรรมที่เกี่ยวข้องกับปัญหาเหล่านี้คือการศึกษาลักษณะของกระบวนการและการตรวจสอบกระบวนการ นอกจากนี้เครื่องมือ Quality by Design (QbD) และ Design of Experiments (DoE) มักถูกนำมาใช้
คำสำคัญ: การพัฒนา ปรับแต่ง และตรวจสอบกระบวนการ, กระบวนการหมัก, การหมักเซลล์จุลชีพ, การหมักแบคทีเรีย, การหมักยีสต์, การหมักความหนาแน่นสูง, การหมักเชื้อสายวิศวกรรม
การประยุกต์ใช้: อุตสาหกรรมไบโอฟาร์มา, ยาสำหรับมนุษย์, ยาสำหรับสัตว์, วัคซีน, ชีวโมเลกุลขนาดใหญ่ที่สร้างขึ้นใหม่, ชีวโมเลกุลที่สร้างขึ้นใหม่, เรจินที่เกี่ยวข้องกับชีวภาพ
USP Solutions ของ Yaohai Bio-Pharma
ด้วยประสบการณ์ด้านการหมักจุลชีพมากกว่า 10 ปี Yaohai Bio-Pharma มีความเชี่ยวชาญในการช่วยแก้ปัญหาความท้าทายในกระบวนการหมัก เราสามารถสร้างกลยุทธ์การหมักความหนาแน่นสูงได้อย่างรวดเร็วสำหรับ Escherichia coli (E. coli) การหลั่งเพอริพลาสม์ การแสดงออกที่ละลายในเซลล์หรือการแสดงออกในรูปแบบ inclusion body และการแสดงออกนอกเซลล์หรือในเซลล์ของยีสต์
บริการพัฒนาหมักทั่วไปที่เรามี ได้แก่:
- การออกแบบกระบวนการหมักในขนาดเล็ก 7 ลิตรในโหมด fed-batch
- การตรวจสอบความถูกต้องของกระบวนการสามชุดในหม้อหมักขนาด 7 ลิตร
- การขยายขนาดกระบวนการระดับกลางเป็น 30L/70L
เราสามารถปรับแต่งหลายพารามิเตอร์อย่างยืดหยุ่นเพื่อให้ได้ผลผลิตหรือสัดส่วนตามที่ต้องการ โดยใช้วิธี One-Time-A-Factor (OTAF) หรือ Design-of-experiments (DoE)
พารามิเตอร์สำคัญของการหมักมีดังนี้:
องค์ประกอบของสารอาหารสำหรับการหมักที่ไม่มีส่วนผสมจากสัตว์
สารอาหารที่ไม่มีแอนติบัยโอติก หรือมีแอนติบัยโอติก รวมถึงปริมาณ Inoculum
อุณหภูมิการเจริญเติบโต, pH, ระดับออกซิเจนละลายน (DO)
โหมดการให้อาหาร (เช่น fed-batch)
ความเข้มข้นของตัวกระตุ้น (เช่น IPTG, เมทานอล), จุดที่กระตุ้น (น้ำหนักเซลล์เปียก/OD600),
อุณหภูมิในการกระตุ้น, เวลาในการกระตุ้น
ฯลฯ
รายละเอียดบริการ
| บริการ |
กระบวนการไหล |
| การเพาะเลี้ยงใน Shake Flask (500 มล.) |
การเตรียมสารอาหารที่ไม่มีส่วนประกอบจากสัตว์ → การเพาะเลี้ยงเมล็ดจุลชีพ → การเพาะเลี้ยงในเครื่องเขย่า → การกระตุ้น → การเก็บเกี่ยว |
| การเพาะเลี้ยงในหม้อน้ำตาล (7 ลิตร) |
การเตรียมสารอาหารที่ไม่มีส่วนประกอบจากสัตว์ → การเพาะเลี้ยงเมล็ดจุลชีพ → การหมักเซลล์ความหนาแน่นสูงในหม้อปฏิกรณ์ชีวภาพขนาด 7 ลิตร → การกระตุ้น → การเก็บเกี่ยว |
| การควบคุมคุณภาพของโปรตีน/เปปไทด์ |
การเตรียมตัวก่อนและวิเคราะห์คุณภาพ การแสดงออกในเซลล์: การเก็บเกี่ยวและการละลายเซลล์จุลชีพ → การทำลายด้วยคลื่นเสียง → การกำจัดเศษซากเซลล์ → สารสกัดขั้นต้น การแสดงออกของร่างกายรวม: การเก็บเกี่ยวและการละลายเซลล์จุลชีพ → การทำลายด้วยคลื่นเสียง → การเตรียมร่างกายรวม → สารสกัดขั้นต้น การแสดงออกนอกร่างกาย: การรวบรวมสารละลายหลังจากการเพาะเลี้ยง → การเข้มข้นและการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ → สารสกัดขั้นต้น การวิเคราะห์คุณภาพ ใช้สารสกัดขั้นต้นเป็นตัวอย่าง → การวิเคราะห์โปรตีนเป้าหมายด้วย SDS PAGE หรือ Western blotting (WB) |
| การควบคุมคุณภาพของพลาสมิด |
การเตรียมตัวก่อนและวิเคราะห์คุณภาพ การสกัดพลาสมิด → การวิเคราะห์ดีเอ็นเอกับการแยกด้วยเจลอะแกโรส |
กรณีศึกษา
เราได้รับมอบหมายจากลูกค้าของเราให้เพิ่มผลผลิตของฮอร์โมนโพลีเปปไทด์เป้าหมายจาก 8 กรัม/ลิตร เป็น 10 กรัม/ลิตร
จากการออกแบบแบบเต็มปัจจัย (Full Factorial Design) และการออกแบบพื้นผิวคำตอบ (Response Surface Design) ในเครื่องมือ DoE เราได้รับรู้และปรับแต่งพารามิเตอร์การหมักที่สำคัญอย่างรวดเร็ว โดยกระบวนการหมักความหนาแน่นเซลล์สูงภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม ระดับการแสดงออกเพิ่มขึ้นเป็น 10 กรัม/ลิตร
ประสบการณ์ของเรา
- เราได้ทำงานกับโฮสต์ไมโครเบียหลากหลายชนิด เช่น อี.โคไล DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink สายพันธุ์ 1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) และ Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- เรามีประสบการณ์ในด้าน E. coli การหลั่งโปรตีนในเยื่อหุ้มเซลล์ การแสดงออกของโปรตีนที่ละลายได้และการแสดงออกของ inclusion body นอกจากนี้ยังรวมถึงการแสดงออกภายในเซลล์หรือนอกเซลล์ในยีสต์ ปริมาณผลผลิตของ inclusion body สูงถึง 10 กรัม/ลิตร ในขณะที่ปริมาณโปรตีนที่ละลายได้มีช่วงระหว่าง 0.5 ถึง 15 กรัม/ลิตร
- เราได้มีส่วนร่วมในการพัฒนาและการผลิตโมเลกุลขนาดใหญ่หลายชนิด รวมถึงวัคซีนยูนิต рекombinat (recombinant subunit vaccines), อนุภาคไวรัสที่คล้ายคลึง (VLPs), ฮอร์โมน (อินซูลิน, GLP-1, ฮอร์โมนการเจริญเติบโต), ไซโตไคน์ (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), ปัจจัยการเจริญเติบโต (EGF, FGF, NGF), นาโนบอดี้/แอนติบอดีโดเมนเดียว (sdAbs), เอนไซม์ เป็นต้น
- อุปกรณ์
7L*16 ระบบหมัก
เครื่องวิเคราะห์ Cedex Bio Analyzer, เครื่องวิเคราะห์กระบวนการชีวภาพ
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
