โปรตีนที่ถูกสร้างขึ้นใหม่มักจะพบการออกซิเดชันของกลุ่ม铡กรดอะมิโนที่อยู่ภายนอก เช่น ทริปโตเฟน (Trp) และเมธิโอนีน (Met) ส่งผลให้คุณสมบัติทางกายภาพและเคมีของโปรตีนเปลี่ยนแปลง การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้อาจส่งผลกระทบต่อการทำงานทางชีวภาพของโปรตีนที่ได้รับผลกระทบ เช่น การสูญเสียการจับกับโมเลกุลอื่น การลดลงของกิจกรรมเอนไซม์ หรือการกำจัดออกจากเซลล์อย่างรวดเร็วเกินไป โปรตีนเป็นเป้าหมายสำคัญสำหรับปฏิกิริยาออกซิเดชัน เนื่องจากพวกมันสามารถทำปฏิกิริยากับสารออกซิแดนท์ได้อย่างรวดเร็ว และมีอยู่อย่างมากในเซลล์ เนื้อเยื่อภายนอกเซลล์ และของเหลวในร่างกาย
ดังนั้น การตรวจสอบการออกซิเดชันของโปรตีนจึงมีความสำคัญต่อการพัฒนายาชีวภาพที่ประสบความสำเร็จ
Yaohai Bio-Pharma ให้บริการวิเคราะห์การออกซิเดชันของกรดอะมิโน ซึ่งช่วยให้คุณสามารถกำหนดการออกซิเดชันของกรดอะมิโนโดยใช้วิธีโครมาโทกราฟีแบบของเหลวเชื่อมโยงกับสเปกโตรมิเตอร์มวล (LC-MS)
เราได้มีส่วนร่วมในการศึกษาโครงสร้างโปรตีนของโมเลกุลขนาดใหญ่หลายชนิด รวมถึงวัคซีนยูนิต рекомบิเนชัน, Nanobodies/ VHHs/แอนติบอดีโดเมนเดี่ยว (sdAbs), ชิ้นส่วนของแอนติบอดี, ฮอร์โมน/เปปไทด์, ไซโตไคน์, แฟคเตอร์การเจริญเติบโต (GF), เอนไซม์, คอลลาเจน เป็นต้น
ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบสำหรับการออกซิเดชันของกรดอะมิโน
ตามแนวทาง ICH Q6B รูปแบบที่ถูกออกซิไดซ์อาจตรวจพบและอธิบายลักษณะโดยวิธีโครมาโทกราฟี, อิเล็กโทรโฟรีซิส และ/หรือวิธีการวิเคราะห์อื่น ๆ ที่เกี่ยวข้อง (เช่น High Performance Liquid Chromatography (HPLC), อิเล็กโทรโฟรีซิสในหลอดแคปปิลารี, สเปกโตรสโคปีมวล, การหมุนเวียนดิชโรอิซึม)
วิธีการทางการวิเคราะห์
| การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
| การออกซิเดชันของกรดอะมิโน |
LC-MS, Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) หรือ Hydrophobic Interaction Chromatography High Performance Liquid Chromatography (HIC-HPLC) และสเปกโตรสโคปีมวล |
ขั้นตอนการวิเคราะห์
1. การเตรียมตัวอย่าง
2. LC-MS
3. การวิเคราะห์ข้อมูล
กรดอะมิโนทริปโตเฟน (Trp) มีความไวต่อการออกซิเดชันเป็นพิเศษเนื่องจากปฏิกิริยาสูงของโมเลกุลไนโดลแบบอะโรมาติกกับสารออกซิเจนที่มีปฏิกิริยาสูง การออกซิเดชันของ Trp จำเป็นต้องมีการเปิดเผยของอนุภาค Trp ที่ปกติจะถูกฝังอยู่ในโครงสร้างสามมิติของโปรตีน
อย่างไรก็ตาม เมื่ออนุภาค Trp ถูกออกซิเดชัน พวกมันสามารถเปลี่ยนแปลงเป็นผลิตภัณฑ์หลากหลายชนิดที่มีคุณสมบัติแตกต่างไปจาก Trp เดิมอย่างมาก ทางเดินที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการออกซิเดชันของ Trp รวมถึงการก่อตัวของ N-formylkynurenine (ความต่างมวล: +32)
กรดอะมิโนที่ถูกออกซิเดชันบ่อยอีกชนิดหนึ่งคือเมธไอโอนีน อะตอมซัลเฟอร์ในอนุภาค Met สามารถรับออกซิเจนได้ทั้งหนึ่งหรือสองอะตอม ส่งผลให้เกิด sulfoxide (ความต่างมวล: +16) หรือ sulfone (ความต่างมวล: +32) ตามลำดับ การปรับแต่งนี้พบได้ค่อนข้างบ่อยเนื่องจากการเปิดเผยบนผิวของ Met ที่สูงโดยทั่วไป
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
