In vitro sintese van mRNA
Die hoofkomponente van mRNA is 5'-cap, 5'-UTR, oop leesraam (ORF), 5'-UTR, en 5' poly A stert, wat noodsaaklik is vir die handhawing van mRNA funksie. Navorsers het 'n verskeidenheid metodes gebruik om mRNA-volgordes en strukture te identifiseer en te optimaliseer.
Die sintese van mRNA word uitgevoer op grond van in vitro-transkripsie (IVT) deur gebruik te maak van lineêre DNA-sjablone, RNA-polimerases (T3, T7 of SP6), ongemodifiseerde of gemodifiseerde nukleotiede, ensieme en toepaslike reagense.
5' Cap Modifikasie
Die rye van volwasse mRNA vanaf eukariosiete toon 'n 7-metielguanosien (m7G) dop aan die 5'-punt, wat mRNA stabiliteit en translasiedoeltreffendheid verbeter. Daar is twee algemene metodes vir die vaslegging van mRNA in vitro. Eerstens kan mRNA saam met in vitro-transkripsie beperk word deur 'n cap-analoog van die m7GpppG-struktuur (bv. CleanCap) by die IVT-stelsel by te voeg. Hierdie ko-transkripsie-bedekkingsmetode verskaf 'n natuurlike 5'-kapsulestruktuur en verhoog die bedekkingsdoeltreffendheid tot byna 90-99%. Tweedens kan mRNA-kartering ook bewerkstellig word deur ensiemreaksies na die in vitro-transkripsie-reaksie te karteer.
PolyA Modifikasie
Poli(A) stert verleng ook die halfleeftyd van mRNA in vivo en verbeter mRNA translasie doeltreffendheid. Die lengte van die geamplifiseerde poli(A) stert moet 100-300 nukleotiede wees. Boonop verhoog gemodifiseerde adenosien die stabiliteit van die poli A-stert teen sellulêre RNase-afbraak. Poli A stert kan ingevoeg word deur in vitro transkripsie deur gebruik te maak van DNA sjabloon wat vir poli A kodeer, wat sodoende 'n spesifieke poli A volgorde lengte tot gevolg het. Rekombinante poli A polimerase kan ook gebruik word deur ensiematiese poliadenilering na mRNA transkripsie.
Nukleotiede Modifikasie
Gemodifiseerde nukleosiede kan patroonherkenningsreseptore (PRR) herkenning en/of aktivering inhibeer en die doeltreffendheid van mRNA-entstowwe op twee totaal verskillende maniere verbeter. die byvoeging van sekere chemies gemodifiseerde nukleosiede, insluitend pseudouridien (ψ), 1-metielpseudouridien (m1ψ), tioridien (s4U) en 5-metielsitosien (m5C), kan die aktivering van TLR7/8 en ander ingebore immuunreseptore voorkom, wat die immunogenisiteit aansienlik verminder. van mRNA.
mRNA afleweringstelsel
Om die funksie van mRNA te handhaaf, moet dit die gasheersitoplasma binnegaan en spesifieke antigene uitdruk. Een van die moeilikste uitdagings wat mRNA-entstowwe en -terapieë in die gesig staar, lê in die lewering van mRNA in teikenselle met voldoende hoë translasievlakke omdat dit hoogs spesifieke en doeltreffende mRNA-afleweringstelsels vereis. Verskeie mRNA afleweringsvektore is ontwikkel en gebruik, insluitend dendritiese selle (DC's), protamien, kationiese polimere en kationiese liposome.
Komplekse van kationiese lipiede met mRNA en ander preparate kan gesamentlik 80-200 nm-grootte nanopartikels genaamd lipied-nanopartikels (LNPs) vorm. As een van die mees gevorderde mRNA-afleweringstelsels, sluit LNP ioniseerbare kationiese lipiede, natuurlike fosfolipiede, cholesterol en poliëtileenglikol (PEG) in. Verskeie RNA-entstowwe en terapieë (siRNA en mRNA) wat deur die Amerikaanse voedsel- en dwelmadministrasie goedgekeur is, is gebaseer op LNP-afleweringstelsels.
Yaohai Bio-Pharma bied eenstopoplossing vir RNA
Pasgemaakte aflewerings
|
Graad
|
Aflewerbares
|
Spesifikasie
|
aansoeke
|
|
nie-GMP
|
Dwelmstof, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Prekliniese navorsing soos seltransfeksie, Ontwikkeling van analitiese metodes, Pre-stabiliteitstudies, Formuleringsontwikkeling
|
|
Geneesmiddelproduk, LNP-mRNA
|
|
GMP, Steriliteit
|
Dwelmstof, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Ondersoekende nuwe geneesmiddel (IND), Magtiging vir kliniese proefnemings (GTA), verskaffing van kliniese proefnemings, aansoek om biologiese lisensies (BLA), kommersiële verskaffing
|
|
Geneesmiddelproduk, LNP-mRNA
|
5000 flessies of voorafgevulde spuite/patrone
|
AF
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
MS
BE
MK
UR
BN
