การเตรียม CircRNA ต้องใช้ RNA เชิงเส้นเป็นวัสดุตั้งต้น (สารตั้งต้น RNA) สำหรับการหมุนเวียน โดยที่สารตั้งต้น RNA มักจะเตรียมโดยใช้ DNA พลาสมิดเชิงเส้นตรงเป็นเทมเพลตการถอดรหัสและถอดความ ในหลอดทดลอง ด้วยความช่วยเหลือของ T7 RNA polymerase
พลาสมิด DNA คุณภาพสูงเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการถอดรหัสภายนอกร่างกาย (IVT) Yaohai Bio-Pharma อาศัยแพลตฟอร์มบริการเตรียมพลาสมิดที่สมบูรณ์ สามารถให้บริการเตรียมพลาสมิด DNA (pDNA) เชิงเส้นตรงที่มีความบริสุทธิ์สูงและได้มาตรฐาน เพื่อรับรองความสมบูรณ์ของผลิตภัณฑ์ IVT
กระบวนการ | บริการเสริม | รายละเอียดบริการ | ระยะเวลาจัดส่ง (วันทำงาน) |
การเตรียมพลาสมิดแบบวงกลม | การสังเคราะห์ยีน | การสังเคราะห์ยีน (บุคคลที่สาม) | 7-10 |
การขยายพลาสมิด | การขยายพลาสมิด | 2 | |
การสกัดพลาสมิด | |||
การเตรียมพลาสมิดเชิงเส้น | พลาสมิดเชิงเส้นและการทำให้บริสุทธิ์ | พลาสมิดเชิงเส้น | 1 |
การทำให้บริสุทธิ์ DNA เชิงเส้น | |||
การควบคุมคุณภาพพลาสมิดดีเอ็นเอ | ความเข้มข้นของความบริสุทธิ์ | สเปกโตรโฟโตมิเตอร์อัลตราไวโอเลต (UV) | 1-2 |
โครงสร้างพลาสมิด | อะกาโรสเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส (AGE) | ||
อิเล็กโตรโฟรีซิสของเส้นเลือดฝอย (CE) - ไม่จำเป็น | |||
ระบุพลาสมิด | การระบุเอนไซม์จำกัด/AGE |
การเลือกวิธีการเชิงเส้นแบบยืดหยุ่น
การเพิ่มประสิทธิภาพวิธีการสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของ DNA เพื่อให้ได้อัตราการฟื้นตัวสูง
มาตรฐานการควบคุมกระบวนการที่เข้มงวด โดยมีอัตราการสร้างโครงสร้างเหนือชั้นของตัวอย่างพลาสมิดเพื่อการวิจัยมากกว่า 80%
บริการเตรียมพลาสมิดและควบคุมคุณภาพที่ได้มาตรฐานและมีประสิทธิภาพสูง เพื่อตอบสนองความต้องการในการทดลอง
เมื่อยกตัวอย่างผลิตภัณฑ์ mCherry circRNA ของ Yaohai Bio-Pharma พบว่าอัตราส่วนซูเปอร์คอยล์ของตัวอย่างพลาสมิดของเทมเพลตการถอดรหัส (เกรดการวิจัย) นั้นมากกว่า 70% โดยมีอัตราการสร้างเชิงเส้นเกือบ 100%
mCherry circRNA ถูกเตรียมด้วยพลาสมิดเชิงเส้นเป็นเทมเพลตและแปลงสภาพเป็นเซลล์ 293T การแสดงออกของการเรืองแสงในระดับสูง (เรืองแสงสีแดง) จะถูกตรวจพบหลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมงของการทรานส์เฟกชั่น ซึ่งจะเพิ่มขึ้นหลังจาก 48 ชั่วโมง และยังคงสามารถตรวจพบได้ในวันที่ 7 และวันที่ 14 หลังจากการทรานส์เฟกชัน
โปรตีน mCherry มีการแสดงออกอย่างเสถียรและมีประสิทธิภาพ และความบริสุทธิ์ของเทมเพลตการถอดเสียงสามารถตอบสนองความต้องการของผลิตภัณฑ์ยา circRNA (DP) ที่มีคุณภาพสูง
การตรวจสอบการแสดงออก ในหลอดทดลอง ของ mCherry circRNA