mRNA แบบวงกลม (circRNA) ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาการทำงานของยีนหรือโปรตีน ในขณะเดียวกัน ก็ได้รับความนิยมในการพัฒนาทางชีววิทยาเชิงป้องกันและรักษาโรค คล้ายกับ mRNA
Yaohai Bio-Pharma ได้สร้างชุดเทคโนโลยีการสังเคราะห์ circRNA เพื่อมอบ RNA คุณภาพสูง เช่น การออกแบบลำดับและการเพิ่มประสิทธิภาพ การถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) การหมุนเวียน/การหมุนเวียน การทำให้บริสุทธิ์ และการห่อหุ้มอนุภาคนาโนไขมัน (LNP) ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดได้รับการเผยแพร่ภายใต้มาตรฐานการควบคุมคุณภาพ (QC) ที่เข้มงวด
เมื่อเปรียบเทียบกับ mRNA เชิงเส้น RNA แบบวงกลม (circRNA) มีความเสถียรในโครงสร้างมากกว่า และเป็นจุดร้อนที่สำคัญในการวิจัยยากรดนิวคลีอิกในปัจจุบัน มีการใช้งานที่หลากหลายในสาขาต่างๆ ไม่ว่าจะเป็นการเข้ารหัส circRNA หรือ circRNA แบบไม่เข้ารหัส รวมถึงวัคซีนป้องกันโรคติดเชื้อ วัคซีนรักษามะเร็งวิทยา ยารักษาโรคเนื้องอกวิทยา การบำบัดทดแทนโปรตีน เวชศาสตร์ฟื้นฟู เซลล์และยีนบำบัด (CGT) บทบาทของฟองน้ำโมเลกุลและ RNA aptamer
กระบวนการ | บริการเสริม | รายละเอียดบริการ | ระยะเวลาจัดส่ง (วัน) |
การออกแบบและการเพิ่มประสิทธิภาพลำดับ circRNA | การออกแบบและการเพิ่มประสิทธิภาพลำดับการเข้ารหัส | การเพิ่มประสิทธิภาพ Codon CDS | 1 |
การออกแบบและการเพิ่มประสิทธิภาพของลำดับที่ไม่เข้ารหัส | ลำดับอินตรอนและเอ็กซอน การออกแบบและการเพิ่มประสิทธิภาพของแขนและตัวเว้นวรรคที่คล้ายคลึงกัน | 1-2 | |
การเตรียมพลาสมิดแบบวงกลม | การสังเคราะห์ยีน | การสังเคราะห์ยีน (บุคคลที่สาม) | 7-10 |
การขยายพลาสมิด | การขยายพลาสมิด | 2 | |
การสกัดพลาสมิด | |||
การเตรียมพลาสมิดเชิงเส้น | พลาสมิดเชิงเส้นและการทำให้บริสุทธิ์ | พลาสมิดเชิงเส้น | 1 |
การทำให้บริสุทธิ์ DNA เชิงเส้น | |||
การถอดความและการหมุนเวียนในหลอดทดลอง | การถอดความและการหมุนเวียนในหลอดทดลอง | ปฏิกิริยาการถอดความและไซคลิกไลเซชันภายนอกร่างกาย | 1-2 |
RNase R การย่อยอาหาร | |||
การเพิ่มประสิทธิภาพไม่จำเป็น | องค์ประกอบปฏิกิริยา การปรับเวลาให้เหมาะสม | 2-5 | |
การทำให้บริสุทธิ์ของ circRNA | วิธีการทำให้บริสุทธิ์แบบดั้งเดิม | การตกตะกอนของลิเธียมคลอไรด์ | 1 |
การทำให้บริสุทธิ์ด้วยลูกปัดแม่เหล็ก | 1 | ||
การทำให้บริสุทธิ์ circRNA บริสุทธิ์สูง | โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบเตรียมการ (HPLC) | 1-2 | |
การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ | อัลตราฟิลเตรชัน | 1 | |
การไลโอฟิไลเซชันของ circRNA | การบรรจุตัวอย่าง | การกรอก | 2-3 |
ไลโอฟิไลเซชั่น | ก่อนแช่แข็ง | ||
การอบแห้งเบื้องต้น (การระเหิด) | |||
การอบแห้งขั้นที่สอง (การดูดซับ) | |||
การห่อหุ้ม circRNA-LNP | การห่อหุ้ม LNP | การปรับสภาพวัสดุและของเหลว | 2 |
การผสมอุปกรณ์ไมโครฟลูอิดิก | |||
การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ | การกรองการไหลแบบสัมผัส | 1 | |
ผ่านการฆ่าเชื้อ | การกรอง | ||
การควบคุมคุณภาพของพลาสมิดดีเอ็นเอ | ความเข้มข้น/ความบริสุทธิ์ | เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์อัลตราไวโอเลต (UV) | 1-2 |
โครงสร้างพลาสมิด | อะกาโรสเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส (AGE) | ||
Capillary Electrophoresis (CE) - ทางเลือก | |||
ระบุพลาสมิด | การจำกัดการระบุเอนไซม์/AGE | ||
การควบคุมคุณภาพของ circRNA | ความเข้มข้น/ความบริสุทธิ์ | เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์อัลตราไวโอเลต (UV) | - |
ความบริสุทธิ์ | Agarose Gel Electrophoresis (AGE)/อี-เจล | 0.5 | |
HPLC-ไม่จำเป็น | 1 | ||
การควบคุมคุณภาพของ circRNA-LNP | ประสิทธิภาพการห่อหุ้ม | วิธีไรโบกรีน | 1 |
ขนาดอนุภาค | การกระเจิงแสงแบบไดนามิก (DLS) | 1 | |
ดัชนีความหลากหลาย | การกระเจิงแสงแบบไดนามิก (DLS) | 1 | |
ศักยภาพซีต้า | การกระเจิงแสงแบบไดนามิก (DLS) | 1 | |
การทดสอบศักยภาพตามเซลล์ | การเปลี่ยนถ่ายเซลล์ | การชุบเซลล์, การถ่ายเซลล์ | 4 |
การตรวจจับโปรตีนเป้าหมาย | การสังเกตการเรืองแสง, Western Blot/ELISA | 1-3 |
เราแปลงโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่ได้รับการปรับปรุง circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA ลงในเซลล์ 293T และตรวจพบโปรตีนเป้าหมายผ่านการเรืองแสง, สัญญาณเรืองแสงหรือสี, western blot (WB), การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA)
การทดสอบศักยภาพตามเซลล์ของตัวอย่าง circRNA โดย Yaohai Bio-Pharma