การครอบปลาย 5' ของ mRNA เป็นการแก้ไขที่สำคัญ mRNA ที่มีโครงสร้างครอบ โดยเฉพาะโครงสร้าง Cap1 จะช่วยให้ mRNA หลีกเลี่ยงการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันในร่างกาย ส่งผลให้มีการแปลรหัสโปรตีนอย่างมีประสิทธิภาพ
การครอบ mRNA แบบเอนไซม์ (วิธีสองขั้นตอน) เป็นวิธีปกติของการครอบ mRNA โดยคล้ายกับกระบวนการครอบในสิ่งมีชีวิตแบบยูคารีโอต เมื่อเอนไซม์หลายชนิดทำงานร่วมกัน 7-methylguanine (m7G) จะเชื่อมโยงกับปลาย 5' ของ mRNA ผ่านพันธะไตรฟอสเฟต 5'-5' และได้รับการแก้ไขด้วยเมทิลเพื่อสร้างโครงสร้างครอบ Cap 1 (m7GpppN)
แผนภาพของการสร้างโครงสร้างครอบตามธรรมชาติ
กระบวนการทำงานของการครอบเอนไซม์เป็นดังนี้:
ดีเอ็นเอพลาสมิดที่ถูกทำให้เป็นเส้นตรงใช้เป็นแม่แบบสำหรับการทรานสคริปชันในหลอดทดลอง (IVT) ในสภาพแวดล้อมของโพลิเมอเรส T7 และอาร์เอ็มเอ็นเอที่มีโครงสร้างแคปที่ปลาย 5' จะเกิดขึ้นหลังจากการกรองหนึ่งขั้นตอนโดยใช้เอนไซม์แคปปิ่งจากวัคซีเนียและ 2'-O-เมธิลทรานسفيرเรส
รายละเอียดบริการ
บริการเพิ่มเติม |
รายละเอียดบริการ |
ระยะเวลาส่งมอบ (วัน) |
การปิดจุก enzymatic ของ mRNA |
ปฏิกิริยาการแคปด้วยเอนไซม์ |
1 |
การปรับแต่งปฏิกิริยาการแคป - ตัวเลือก |
การออกแบบและปรับแต่งองค์ประกอบของปฏิกิริยา |
3~7 |
คุณลักษณะของเรา
- ออกแบบและปรับแต่งองค์ประกอบของการแคปปิ่ง
องค์ประกอบของการแคปปิ่งได้รับการปรับแต่ง และการผลิตอาร์เอ็มเอ็นเอทรานสคริปต์เพิ่มขึ้นอย่างมาก
- การตรวจสอบการแสดงออกในหลอดทดลอง
อาร์เอ็มเอ็นเอที่ผ่านการแคปถูกทรานเฟอร์เข้าสู่เซลล์ 293T และสามารถตรวจพบการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายได้
- ควบคุม RNase อย่างเข้มงวด
ผ่านการควบคุมอย่างเข้มงวดของ RNases ในสภาพแวดล้อมการทดลองและอุปกรณ์ที่ใช้ การเสื่อมสภาพของ mRNA จะถูกป้องกันอย่างมีประสิทธิภาพ
กรณีศึกษา
แพลตฟอร์ม mRNA ของ Yaohai Bio-Pharma ได้พัฒนากระบวนการตอบสนองการใส่หมวกที่สมบูรณ์แบบ
สำหรับ mRNA eGFP mRNA ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ก่อนหน้าที่เตรียมโดยวิธี enzymatic capping สามารถสังเกตเห็นสัญญาณแสงเรืองรอง (แสงสีเขียว) จาก eGFP ในระดับสูงหลังจากทำการ transfected เซลล์ 293T เป็นเวลา 24 ชั่วโมง โดยตรวจจับด้วย Western Blot (WB) ซึ่งแสดงให้เห็นว่าโปรตีนเป้าหมาย enhanced green fluorescent protein (eGFP) สามารถแสดงออกใน vitro ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
การแสดงออกของ eGFP mRNA ที่ capped ด้วยเอนไซม์ในเซลล์ 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
