เมื่อเปรียบเทียบกับกระบวนการปิดห่วงโซ่เอนไซม์สองขั้นตอน วิธีการปิดห่วงโซ่แบบ co-transcriptional หนึ่งขั้นตอนสามารถลดกระบวนการทำงานได้อย่างเห็นได้ชัด วิธีนี้เน้นไปที่ผลลัพธ์ โดยเกี่ยวข้องกับการเพิ่มสารประกอบ cap analogs ลงในปฏิกิริยาการถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) สารประกอบ cap analogs สามารถถูกใส่ลงไปในช่วงเริ่มต้นของการถอดรหัส และ mRNA ที่มีโครงสร้าง cap จะได้รับเมื่อสิ้นสุดการถอดรหัส สารประกอบ cap analogs เจนเนอเรชันที่สามในปัจจุบันสามารถหลีกเลี่ยงการปิดห่วงโซ่กลับ และเพิ่มโครงสร้าง Cap 1 ลงในผลิตภัณฑ์การถอดรหัสโดยตรง
สำหรับการพิจารณาเกี่ยวกับความเป็นภูมิคุ้มกันในตัวของ mRNA และประสิทธิภาพในการแปลรหัส พลวัต IVT มักจะใช้ NTPs ที่ถูกดัดแปลงบางประเภท และนิวคลีโอไทด์ที่ถูกดัดแปลงทั่วไปคือ pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) และ 5-methylcytosine (5mC)
รูป: แผนผังปฏิกิริยาการปิดห่วงโซ่ mRNA แบบ Co-transcriptional
รายละเอียดบริการ
บริการ |
รายละเอียดบริการ |
ระยะเวลาส่งมอบ (วันทำงาน) |
การปิดห่วงโซ่แบบ Co-transcriptional |
คำตอบจากการถอดรหัสในหลอดทดลอง (Clean Cap analog) |
1-2 |
| การดัดแปลงนิวคลีโอไทด์ (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| การกำจัดเทมเพลต DNA (DNase I) |
การปรับแต่งเงื่อนไข IVT - ตัวเลือก |
การออกแบบและปรับแต่งองค์ประกอบของปฏิกิริยา |
3-7 |
คุณลักษณะของเรา
- กลยุทธ์การดัดแปลงนิวคลีโอไทด์ที่หลากหลาย
มีหลายกลยุทธ์ในการดัดแปลงนิวคลีโอไทด์ซึ่งสามารถปรับปรุงการแสดงออกของโปรตีนได้
- ระบบปฏิกิริยาที่ได้รับการปรับแต่ง
บรรลุอัตราส่วนการถอดรหัสสูงและการครอบจับที่มีประสิทธิภาพสูง
- กระบวนการครอบจับที่เสถียร
บรรลุอัตราการครอบจับมากกว่า 95%.
- ควบคุม RNase อย่างเข้มงวด
ป้องกันการเสื่อมสภาพของ mRNA อย่างมีประสิทธิภาพโดยควบคุม RNase อย่างเข้มงวดในสภาพแวดล้อมการทดลองและอุปกรณ์สำหรับการใช้งาน
กรณีศึกษา
Yaohai Bio-Pharma ได้สร้างแพลตฟอร์มกระบวนการครอบจับแบบร่วมการถอดรหัสที่สุกสม โดยใช้ clean cap analogs เพื่อเพิ่มโครงสร้าง Cap1 โดยตรงในขณะหลีกเลี่ยงการครอบจับย้อนหลัง หลังจากทำการเตรียมตัวอย่างตามมาตรฐานและการตรวจจับด้วยการแยกไฟฟ้าแบบแคปิลารี (CE) อัตราการครอบจับของ mRNA ของโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่ได้รับการเพิ่มประสิทธิภาพ (eGFP) สามารถบรรลุมากกว่า 95%.
ประสิทธิภาพการครอบจับของ mRNA eGFP มากกว่า 95%
MRNA ของ eGFP และ mRNA ของ mCherry ที่เตรียมไว้โดยการปิดนิวคลีโอไทด์ร่วมกันถูกส่งเข้าสู่เซลล์ 293T ตามลำดับ และหลังจาก 48 ชั่วโมงพบว่ามีสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์อย่างชัดเจน ซึ่งบ่งบอกว่า mRNA แสดงออกได้อย่างมีประสิทธิภาพในเซลล์ 293T
การแสดงออกของ mRNA eGFP และ mRNA mCherry ในเซลล์ 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
