เกี่ยวกับการผลิตมวลชนม RNA การถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพและสุกงอมากกว่า การทำปฏิกิริยา IVT จะใช้ DNA พลาสมิดที่ตัดเส้นตรงแล้วซึ่งมีโปรตีน T7 เป็นแม่แบบ และ mRNA จะถูกสังเคราะห์โดยใช้ไนโตรไซด์ไตรฟอสเฟต (NTPs) เป็นสารตั้งต้นในความเข้มข้นของโพลิเมอเรส T7 RNA
การแก้ไขโครงสร้างนิวคลีโอไทด์เป็นความก้าวหน้าสำคัญในการศึกษา mRNA โดย mRNA ที่ไม่มีการแก้ไขจะถูกตรวจจับโดยเซนเซอร์ RNA ภายในเซลล์เพื่อกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันตามธรรมชาติ ด้วยเหตุนี้ เมื่อพิจารณาถึงความเป็นภูมิคุ้มกันในร่างกายและการแปลรหายีนของ mRNA กระบวนการ IVT มักจะใช้ NTPs ที่มีการแก้ไขบางประเภท โดยนิวคลีโอไทด์ที่แก้ไขทั่วไปได้แก่ พิวโดยูริดีน (Ψ), N1-เมทิล-พิวโดยูริดีน (N1Ψ) และ 5-เมทิลไซโตซีน (5mC)
กระบวนการการถอดแบบในหลอดทดลองของ mRNA
แผนภาพปฏิกิริยาการถอดแบบในหลอดทดลอง (IVT)
รายละเอียดบริการ
บริการเพิ่มเติม |
รายละเอียดบริการ |
ระยะเวลาส่งมอบ (วันทำงาน) |
การทรานสคริปต์ในหลอดทดลอง (IVT) |
IVT, การถอดแบบในหลอดทดลอง |
1 |
| การแก้ไขนิวคลีโอไทด์ (Ψ/N1Ψ/5mC ฯลฯ) |
| การกำจัดเทมเพลต DNA (DNase I) |
การปรับแต่งเงื่อนไข IVT - ตัวเลือก |
การออกแบบและปรับแต่งองค์ประกอบปฏิกิริยา IVT |
2-5 |
คุณลักษณะของเรา
- กลยุทธ์การดัดแปลงนิวคลีโอไทด์ที่หลากหลาย
ปรับปรุงความเสถียรของ mRNA และการแสดงออกของโปรตีนในสภาวะใน vivo ได้。
- การออกแบบและการปรับแต่งการทดสอบอย่างเข้มงวด
สามารถเตรียมชิ้นส่วน mRNA ได้ยาวถึง 10kb。
- การทรานสคริปชันที่มีประสิทธิภาพ
โดยการปรับแต่งเงื่อนไขปฏิกิริยา IVT อัตราการทรานสคริปชันจะสูงถึง 1:200
- ควบคุม RNase อย่างเข้มงวด
ควบคุม RNase อย่างเข้มงวดผ่านสภาพแวดล้อมการทดลองและอุปกรณ์ที่ใช้สามารถป้องกันการเสื่อมของ mRNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
กรณีศึกษา
ระบบปฏิกิริยา IVT ในปัจจุบันได้รับการปรับแต่งให้เหมาะสมสำหรับระบบสังเคราะห์ที่มีความยาวประมาณ 100 nt ไม่ใช่สำหรับ mRNA ที่มีความยาวใดๆ ก็ตาม ยิ่งลำดับ mRNA มีความยาวมากเท่าไร การทรานสคริปชันก็จะยิ่งยากขึ้นและมีแนวโน้มที่จะเสื่อมลงมากขึ้น
เพื่อเตรียมลำดับ mRNA ที่ปรับแต่งได้ตามต้องการ โดยมีความยาวประมาณ 10 กิโลเบส ยาโอไฮ ไบโอ-ฟาร์มา ได้ประสบความสำเร็จในการเตรียมตัวอย่างคุณภาพสูงด้วยอัตราการถอดแบบสูง 1:135 และได้รับผลิตภัณฑ์ mRNA ที่ผ่านการกรองขั้นต้น 135 ไมโครกรัม หลังจากการถอดแบบใน vitro จากพลาสมิดเชิงเส้น 1 ไมโครกรัม ผ่านการออกแบบทดลองอย่างเข้มงวด การปรับปรุงเงื่อนไขปฏิกิริยาอย่างต่อเนื่อง และการควบคุม RNase อย่างเคร่งครัด
ระบุ mRNA (การแยกด้วยเจลอะคารอส)
TH
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
