เกี่ยวกับการเตรียมแบทช์ของพรีเคอร์เซอร์ RNA วิธีที่ใช้กันทั่วไปคือการถอดความในห้องปฏิบัติการ (IVT) การทำปฏิกิริยา IVT ใช้พลาสมิด DNA ที่ถูกตัดเส้นตรงซึ่งมีโปรตีน T7 เป็นเทมเพลต และสังเคราะห์พรีเคอร์เซอร์ RNA โดยใช้ไนโตรไซด์ไตรฟอสเฟต (NTPs) เป็นสารตั้งต้นในสภาพแวดล้อมที่มีโพลิเมอเรส RNA T7
วิธีการหมุนเวียนใน vitro ประกอบด้วยการเชื่อมต่อทางเคมี การเชื่อมต่อด้วยเอนไซม์ และวิธี permuted intron-exon (PIE) การเชื่อมต่อทางเคมีและการเชื่อมต่อด้วยเอนไซม์เหมาะสมสำหรับการหมุนเวียนของ RNA ที่สั้นกว่า เมื่อชิ้นส่วนมีขนาดใหญ่กว่า 100 nt อัตราการหมุนเวียนจะลดลงอย่างมาก ในทางกลับกัน วิธีการใช้ nuclease ที่พัฒนาจากระบบ PIE สามารถทำให้เกิดการหมุนเวียนของลำดับความยาว 8 kb ได้
ภายใต้การเร่งปฏิกิริยาโดย guanosine triphosphate (GTP) โครงสร้าง PIE จะเกิดการหมุนเวียนของลำดับ extra-intron โดยการรวมกลยุทธ์ที่เหมาะสมเพื่อเพิ่มอัตราการหมุนเวียน Yaohai Bio-Pharma สามารถทำให้เกิดการหมุนเวียนของลำดับความยาวถึง 4 kb ได้ โดยมีประสิทธิภาพในการหมุนเวียนมากกว่า 80%
ปฏิกิริยาการหมุนเวียนของ RNA ใน vitro เกิดขึ้นตามลำดับดังนี้:
สารก่อนหน้าของ RNA ถูกสังเคราะห์โดยการถอดแบบใน vitro และองค์ประกอบ PIE จะเสร็จสมบูรณ์ด้วยการตัดตัวเองภายใต้การเร่งปฏิกิริยาโดย GTP เพื่อสร้าง circRNA
รายละเอียดบริการ
| กระบวนการ |
รายละเอียดบริการ |
ระยะเวลาส่งมอบ (วันทำงาน) |
| การถอดรหัสในหลอดทดลองและการหมุนเวียน |
การยืนยันระบบปฏิกิริยา |
1-2 |
| ปฏิกิริยาการถอดแบบดีเอ็นเอในหลอดทดลองและการหมุนเวียน |
| การย่อยด้วย RNase R |
| การปรับแต่งปฏิกิริยา |
องค์ประกอบของปฏิกิริยา การเพิ่มประสิทธิภาพเวลา |
2-5 |
คุณลักษณะของเรา
- การออกแบบและการปรับแต่งการทดสอบอย่างเข้มงวด
สามารถทำให้ RNA หมุนเวียนได้สูงสุด 4 kb。
- ประสิทธิภาพการหมุนเวียนสูง
สามารถบรรลุอัตราการหมุนเวียนมากกว่า 80% ผ่านกลยุทธ์การปรับลำดับที่เหมาะสม;
- ควบคุม RNase อย่างเข้มงวด
ผ่านการควบคุม RNases ในสภาพแวดล้อมการทดลองและอุปกรณ์ใช้แล้วทิ้งอย่างเข้มงวด การเสื่อมสภาพของ RNA จึงถูกป้องกันอย่างมีประสิทธิภาพ
กรณีศึกษา
การหมุนเวียนและการเสริมสร้าง circRNA ในหลอดทดลอง
บนพื้นฐานของระบบ PIE Yaohai Bio-Pharma ได้ปรับปรุงลำดับของ circRNA โดยมีอัตราการหมุนเวียนมากกว่า 80% จากการแยกด้วยเจลอะแกโรส (AGE) โดยใช้ RNase R เพื่อเสริมสร้าง circRNA ผลลัพธ์จากการแยกด้วย E-gel แสดงให้เห็นว่า RNA ต้นแบบเชิงเส้นถูกย่อย และหลังจากทำการฟอกคราบเพิ่มเติม ส่วนใหญ่ของ circRNA ที่มีรอยตัดสามารถถูกลบออกได้ สารละลายสำหรับการฟอกคราบถูกพัฒนาขึ้นเองโดย Yaohai Bio-Pharma
การหมุนเวียนและการเสริมสร้าง circRNA ในหลอดทดลอง
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
