หมวดหมู่ทั้งหมด
ENEN
การถอดความและการไหลเวียน ในหลอดทดลอง

การถอดความและการไหลเวียน ในหลอดทดลอง

หน้าแรก >  IVT อาร์เอ็นเอ  >  การสังเคราะห์ RNA แบบกำหนดเอง  >  การสังเคราะห์ circRNA แบบกำหนดเอง  >  การถอดความและการไหลเวียน ในหลอดทดลอง

IVT อาร์เอ็นเอ

การถอดความและการไหลเวียน ในหลอดทดลอง

สำหรับการเตรียมสารตั้งต้น RNA เป็นกลุ่ม วิธีการที่ใช้กันทั่วไปคือการถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) ปฏิกิริยา IVT ใช้พลาสมิด DNA เชิงเส้นที่มีโปรโมเตอร์ T7 เป็นเทมเพลตและสังเคราะห์สารตั้งต้น RNA ที่มีนิวคลีโอไซด์ไตรฟอสเฟต (NTP) เป็นสารตั้งต้นเมื่อมี T7 RNA polymerase

วิธีการไซคลิกไลเซชันภายนอกร่างกายประกอบด้วยวิธีลิเกชันทางเคมี, ลิเกชันด้วยเอนไซม์ และวิธีเพอร์มิวเต็ดอินตรอน-เอ็กซอน (PIE) การผูกเคมีและเอ็นไซม์ผูกมัดเหมาะสำหรับการทำปฏิกิริยาไซคลิกไลเซชันของ RNA ที่สั้นกว่า เมื่อชิ้นส่วนมีขนาดใหญ่กว่า 100 nt อัตราการหมุนเวียนจะลดลงอย่างมาก ในทางตรงกันข้าม วิธีนิวคลีเอสที่ใช้ระบบ PIE สามารถบรรลุการวนรอบลำดับ 8 kb

ภายใต้การเร่งปฏิกิริยาของกัวโนซีน ไตรฟอสเฟต (GTP) โครงสร้าง PIE จะผ่านการหมุนเวียนของลำดับอินตรอนพิเศษ เมื่อรวมกับกลยุทธ์ที่เหมาะสมในการเพิ่มอัตราการเป็นวงรอบแล้ว Yaohai Bio-Pharma ก็สามารถบรรลุการวนเป็นลำดับได้สูงสุดถึง 4 kb โดยมีประสิทธิภาพในการเป็นวงมากกว่า 80%

ไม่ได้กำหนด

ปฏิกิริยาการหมุนเวียนของ RNA ในหลอดทดลอง จะเป็นดังนี้:

สารตั้งต้น RNA ถูกสังเคราะห์โดยการถอดรหัส ในหลอดทดลอง และส่วนประกอบ PIE ทำการประกบตัวเองจนเสร็จสมบูรณ์ภายใต้การเร่งปฏิกิริยาของ GTP เพื่อสร้าง circRNA

ไม่ได้กำหนด

รายละเอียดบริการ
กระบวนการรายละเอียดบริการระยะเวลาจัดส่ง (วันทำงาน)
การถอดรหัสและการไหลเวียน ในหลอดทดลองการยืนยันระบบปฏิกิริยา1-2
ปฏิกิริยาการถอดรหัสและการเกิดไซคลิก ในหลอดทดลอง
การย่อยอาหาร RNase R
การเพิ่มประสิทธิภาพปฏิกิริยาองค์ประกอบของปฏิกิริยา การปรับเวลาให้เหมาะสม2-5
คุณสมบัติของเรา
    • การออกแบบการทดสอบและการเพิ่มประสิทธิภาพที่เข้มงวด

สามารถสร้าง RNA cyclization ได้สูงสุด 4 kb

    • ประสิทธิภาพการหมุนเวียนสูง

อัตราการหมุนเวียนที่มากกว่า 80% สามารถทำได้ผ่านกลยุทธ์การหาค่าเหมาะที่สุดสำหรับลำดับที่มีเหตุมีผล

    • การควบคุม RNase อย่างเข้มงวด

ด้วยการควบคุม RNases ที่เข้มงวดในสภาพแวดล้อมการทดลองและวัสดุสิ้นเปลือง จึงป้องกันการเสื่อมสลายของ RNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ

กรณีศึกษา

การหมุนเวียน ในหลอดทดลอง และการเพิ่มคุณค่าของ circRNA

Yaohai Bio-Pharma อาศัยระบบ PIE ปรับปรุงลำดับของ circRNA โดยมีอัตราการหมุนเวียนมากกว่า 80% โดย agarose gel electrophoresis (AGE) การใช้ RNase R เพื่อเพิ่มคุณค่าให้กับ circRNA ผลลัพธ์ของ E-gel electrophoresis แสดงให้เห็นว่าสารตั้งต้น RNA เชิงเส้นถูกย่อย และหลังจากการทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมแล้ว circRNA ที่ขาดหายไปส่วนใหญ่ก็สามารถกำจัดออกได้ โซลูชันการทำให้บริสุทธิ์ได้รับการพัฒนาด้วยตนเองโดย Yaohai Bio-Pharma

ไม่ได้กำหนด

การไหลเวียน ในหลอดทดลอง และการเพิ่มคุณค่าของ circRNA

กดรับใบเสนอราคา

ติดต่อเรา