หมวดหมู่ทั้งหมด
ENEN
การสังเคราะห์ saRNA แบบกำหนดเอง

การสังเคราะห์ saRNA แบบกำหนดเอง

หน้าแรก >  IVT RNA  >  การสังเคราะห์ RNA แบบกำหนดเอง  >  การสังเคราะห์ saRNA แบบกำหนดเอง

IVT RNA

การสังเคราะห์ saRNA แบบกำหนดเอง

Self-amplifying mRNA (saRNA) หรือที่รู้จักกันในชื่อ replicon RNA มีลำดับ mRNA ที่ถูกสร้างขึ้นในหลอดทดลอง (IVT) และยีนของไวรัส replicase ที่มาจาก alphavirus หรือ flaviviruses ยีนของไวรัส replicase ช่วยให้มีการขยายตัวของ mRNA โดยตัวมันเอง ส่งผลให้มีการแสดงออกของโปรตีนเพิ่มขึ้นและปริมาณ RNA ที่ต้องการอย่างต่ำเมื่อเปรียบเทียบกับ mRNA ที่ไม่มีการขยายตัว อีกด้านหนึ่งคือ saRNA เป็นโมเลกุลที่ค่อนข้างใหญ่ (มากกว่า 14 kb)

บริษัทยาหาน ไบโอ-ฟาร์มาได้พัฒนาชุดเทคโนโลยีการสังเคราะห์ mRNA เพื่อให้บริการ mRNA ที่ไม่มีการขยายตัวและ mRNA ที่มีการขยายตัวเอง (1000 nt~14000 nt) เช่น การออกแบบและปรับแต่งลำดับ, IVT, การกรองความบริสุทธิ์, การทำให้แห้งแบบไลโอฟาย และการห่อหุ้มในลิโพโซมนาโน (LNP) โดยทุกผลิตภัณฑ์จะผ่านมาตรฐานการควบคุมคุณภาพอย่างเข้มงวด

รูปที่ 1 คุณสมบัติโครงสร้างของ mRNA จากกระบวนการ IVT: mRNA แบบปกติ, แบบวงกลม และแบบมีการขยายตัวเอง

คุณสมบัติลำดับของ mRNA ที่มีการขยายตัวเอง

RNA ที่สามารถขยายตัวเองได้ประกอบด้วยโปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้างสี่ชนิด (กำหนดชื่อว่า nsP1, nsP2, nsP3 และ nsP4) ซึ่งมาจากไวรัสอัลฟาไวรัส ไวรัสไขสันหลังอักเสบในม้าจากเวเนซุเอลา (VEEV) ในจำนวนนี้ nsP1 มีกิจกรรมเอนไซม์สองแบบ คือ GTase และ N7MTase ส่วน nsP2 มีกิจกรรม RTPase ซึ่งเป็นองค์ประกอบสำคัญสำหรับการปิดห่วงโซ่ mRNA ที่ถูกทำขึ้นโดย IVT เพื่อสร้างโครงสร้าง Cap 0 นอกจากนี้ nsP2 ยังทำหน้าที่เป็นโปรตีเอสและเฮลิคาส ช่วยในการประมวลผลที่ซับซ้อนของคอมเพล็กซ์ nsP ทั้งหมด ฟังก์ชันที่แน่นอนของ nsP3 ยังคงไม่ชัดเจน แต่มันมีปฏิสัมพันธ์กับโปรตีนของเซลล์โฮสต์หลายชนิด ซึ่งช่วยลดการตอบสนองต่อไวรัสของโฮสต์

บริเวณโปรตีนย่อยของอัลฟาไวรัส (SGP) อยู่ก่อนหน้ายีนที่สนใจ (GOI) ส่วนประกอบ SGP ช่วยเริ่มต้นกระบวนการถอดรหัส GOI โดยข้ามการอ่านลำดับที่เข้ารหัสโปรตีน nsP ของไวรัส

รูปที่ 2 การสังเคราะห์และการทดสอบเซลล์ของ eGFP saRNA จากแพลตฟอร์ม RNASci ของ Yaohai Bio-Pharma.

โซลูชันที่ปรับแต่งสำหรับ saRNA

โปรโตคอลการสังเคราะห์ของ saRNA เหมือนกับ mRNA: การสังเคราะห์ mRNA แบบกำหนดเอง

  • การออกแบบลำดับเบส
  • การเตรียมพลาสมิดเป็นเทมเพลต
  • การทรานสคริปต์ในหลอดทดลอง (IVT)
  • การปิดจุก enzymatic ของ mRNA
  • การปิดจุกขณะถอดรหัสของ mRNA
  • การกรอง mRNA
  • การ Freeze-dry mRNA
  • การห่อหุ้มด้วย LNP
  • การวิเคราะห์และการทดสอบ

ขอใบเสนอราคาฟรี

Get in touch