Yaohai Bio-Pharma ทำการเตรียม circRNA โดยใช้ระบบ PIE (การจัดเรียงของเอ็กซอนและอินตรอน) ซึ่งอาศัยฟังก์ชันการตัดตัวเองของอินตรอนชนิดที่หนึ่งเพื่อให้เกิดการหมุนเวียนของ RNA โครงสร้าง PIE ได้ออกแบบโดยใช้ยีน T4 td หรือยีนตัวเร่งปฏิกิริยา tRNA ของปลา และมีการจัดเรียงดังนี้:
อินตรอนของ RNA และเอ็กซอนสนับสนุนถูกแบ่งออกเป็นสองส่วน (ปลาย 5' และปลาย 3') โดยที่ลำดับปลาย 5' จะถูกย้ายไปยังท้ายของลำดับเป้าหมาย ส่วนลำดับปลาย 3' จะแทรกเข้าไปข้างหน้าของลำดับเป้าหมาย และลำดับยีนเป้าหมายจะถูกแทรกไว้ตรงกลาง
ภายใต้การเร่งปฏิกิริยาของ GTP โครงสร้าง PIE จะนำไปสู่กระบวนการ cyclization ของลำดับที่ไม่ใช่ introns โดยเมื่อรวมกับกลยุทธ์การเพิ่มประสิทธิภาพอัตรา cyclization อย่างเหมาะสม Yaohai Bio-Pharma สามารถทำให้เกิด cyclization ของลำดับได้ถึง 4 kb โดยมีอัตรา cyclization สูงกว่า 80%
รูปที่ 1. การหมุนเวียนใน vitro ของ circRNA บนพื้นฐานของระบบ PIE
รายละเอียดบริการ
| กระบวนการ |
บริการเพิ่มเติม |
รายละเอียดบริการ |
ระยะเวลาส่งมอบ (วันทำงาน) |
| การออกแบบและปรับแต่งลำดับ circRNA |
การออกแบบและปรับแต่งลำดับรหัสพันธุกรรม |
การจัดเรียงลำดับ CDS
การปรับแต่งโคโดนของ CDS
|
1 |
| การออกแบบและปรับแต่งลำดับที่ไม่ใช้รหัสพันธุกรรม |
การออกแบบและปรับแต่งลำดับ intron และ exon
การออกแบบและปรับแต่งลำดับอาร์เอ็มดีโฮโมโลจัส
การออกแบบและปรับแต่งลำดับสเปเซอร์
|
1-2 |
กลยุทธ์ทั่วไปสำหรับการออกแบบลำดับ mRNA
| องค์ประกอบของ CircRNA |
ฟังก์ชันทางชีวภาพ |
กลยุทธ์การปรับแต่ง |
| ลำดับอินตรอนและเอ็กซอนสองขั้ว |
การตัดตัวเองของอินตรอนที่ได้รับการเร่งปฏิกิริยาโดย GTP เพื่อทำให้ลำดับนอกอินตรอนกลายเป็นวงกลม |
ออกแบบตามยีน T4 td หรือยีนตัวนำ tRNA ของน้ำมันปลา |
| การรหัส |
IRES |
ไซต์การรับรู้ไรโบโซมภายในที่ควบคุมการแปลของ circRNA |
การคัดกรองลำดับไซต์การเข้าสู่ไรโบโซมภายใน (IRES) จากแหล่งที่มาของไวรัสต่างๆ เช่น EMCV, CVB3 แหล่งที่มา |
| CDS |
ภูมิภาคที่สร้างโปรตีน ลำดับที่สร้างแอนติเจน แอนติบอดี หรือโปรตีนที่ทำงานอื่นๆ |
การปรับแต่งโคดอนเพิ่มระดับของการแปล โคดอนบางตัวที่ไม่เหมาะสมอาจมีบทบาทในกระบวนการพับโปรตีน |
| ไม่เป็นรหัส |
ลำดับที่ไม่เป็นรหัส |
กำหนดเป้าหมาย miRNAs หรือโปรตีนเพื่อใช้ในการควบคุมยีนหรือโปรตีน |
การกำหนดเป้าหมายไปยังไซต์ผูกพันเฉพาะสำหรับ miRNAs หรือโปรตีนสามารถซ้ำลำดับของไซต์ผูกพันได้ |
คุณลักษณะของเรา
- ระบบการหมุนเวียน PIE ที่ได้รับการปรับแต่งร่วมกับกลยุทธ์การปรับแต่งที่เหมาะสมเพื่อให้บรรลุอัตราการหมุนเวียนมากกว่า 80%;
- ทีมการปรับแต่ง CDS ที่ล้ำสมัยร่วมมือกับทีมอัลกอริธึม AI มืออาชีพเพื่อดำเนินการปรับแต่งโคดอนในภูมิภาค CDS;
- กระบวนการ circRNA ที่สุกกันและสมบูรณ์แบบสามารถทำได้ด้วยประสิทธิภาพการหมุนเวียนสูง ความเสถียรสูง และประสิทธิภาพในการแปลสูง
กรณีศึกษา
Yaohai Bio-Pharma เปิดตัวผลิตภัณฑ์ควบคุม enhanced green fluorescent protein (eGFP) circRNA ซึ่งอาศัยระบบ PIE เพื่อให้เกิดการหมุนเวียนของ RNA
ใช้สารพาเข้าเซลล์แบบปกติ eGFP circRNA จะถูกพาเข้าเซลล์ 293T และสามารถตรวจจับสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ eGFP (สีเขียว) ได้หลังจาก 24 ชั่วโมง สัญญาณจะเพิ่มขึ้นหลังจาก 48 ชั่วโมง และยังสามารถตรวจจับสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ได้ในวันที่ 7 และวันที่ 14 หลังจากการพาเข้าเซลล์
การตรวจสอบการแสดงออกใน vitro ของ eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
