การทดสอบประสิทธิภาพแบบเซลล์
ความสำคัญของการทดสอบประสิทธิภาพ mRNA
ด้วยการพัฒนาอย่างรวดเร็วของวัคซีน mRNA และการรักษา จำเป็นต้องมีชุดวิธีการวิเคราะห์เฉพาะเพื่อทดสอบประสิทธิภาพ (การกำหนดกิจกรรมทางชีวภาพ) โดยเกี่ยวข้องกับประสิทธิภาพในการแปลรหัสของ mRNA วิธีเหล่านี้มักจะอาศัยการถ่ายโอนสารเข้าสู่เซลล์และการทดสอบการทำงานของโปรตีนเป้าหมาย
ยาหาม ไบโอ-ฟาร์มา ให้บริการการทดสอบประสิทธิภาพแบบเซลล์สำหรับสารยา mRNA หรือผลิตภัณฑ์ LNP รวมถึงการถ่ายโอนสารเข้าสู่เซลล์ (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 เซลล์ เป็นต้น) และการทดสอบ ELISA หรือ Western Blotting (WB)
ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบสำหรับการทดสอบประสิทธิภาพ
ตามข้อพิจารณาด้านการกำกับดูแลของ WHO “ควรมีการกำหนดประสิทธิภาพของวัคซีนสำเร็จรูปแต่ละล็อตโดยใช้วิธีการเชิงปริมาณที่เหมาะสมและได้รับการตรวจสอบแล้ว วิธีการทดสอบประสิทธิภาพในหลอดทดลองอาจรวมถึงระบบการ transfect ในเซลล์หรือการทดสอบที่ไม่ใช้เซลล์” และ USP แนะนำให้ใช้ “cell-based assay” เพื่อทดสอบประสิทธิภาพของ mRNA นั่นคือ การแสดงออกของโปรตีนเป้าหมาย
วิธีการทางเคมีวิเคราะห์
|
การวิเคราะห์
|
วิธีการ
|
|
การทดสอบประสิทธิภาพ
|
การ transfect เซลล์และการระบุโปรตีนเป้าหมาย:
เซลล์ 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 เป็นต้น
|
ขั้นตอนการทำงาน
ขั้นตอนที่ 1. การ transfected เซลล์ด้วย mRNA หรือ mRNA-LNP
เพาะเลี้ยงเซลล์และ transfected ด้วย mRNA หรือ mRNA-LNP โดยละเอียดแล้ว mRNA จะ transfected หลังจากผสมกับสารช่วย transfected ส่วน mRNA-LNP จะ transfected เข้าสู่เซลล์โดยตรง หลังจาก 24-48 ชั่วโมง ให้แยกซุปเปอร์เนตที่มีโปรตีนที่แสดงออกโดยการหมุนเหวี่ยง
ขั้นตอนที่ 2. การทดสอบการทำงานของโปรตีนเป้าหมาย
ทำการทดสอบ ELISA หรือ WB เพื่อประเมินการผูกพันทางหน้าที่ของโปรตีนเป้าหมาย
กรณีศึกษา
การทดสอบประสิทธิภาพแบบเซลล์สำหรับตัวอย่าง mRNA
Yaohai-BioPharma ได้พัฒนาวิธีการทดสอบประสิทธิภาพแบบเซลล์สำหรับ mRNA โดยเกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงเซลล์ การถ่ายโอนสารพันธุกรรมเข้าเซลล์ และการทดสอบฟังก์ชันของโปรตีน เราได้ถ่ายโอน eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA, spike protein mRNA เข้าสู่เซลล์ 293T และตรวจจับโปรตีนเป้าหมายผ่านสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ ลูมิเนสเซนต์ หรือสี รวมถึง WB และ ELISA
การทดสอบประสิทธิภาพแบบเซลล์สำหรับผลิตภัณฑ์ mRNA โดย Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
