In vitro syntese av mRNA
Hovedkomponentene i mRNA er 5'-cap, 5'-UTR, åpen leseramme (ORF), 5'-UTR og 5' poly A-hale, som er avgjørende for å opprettholde mRNA-funksjonen. Forskere har brukt en rekke metoder for å identifisere og optimalisere mRNA-sekvenser og strukturer.
Syntesen av mRNA utføres på grunnlag av in vitro transkript (IVT) ved bruk av lineære DNA-maler, RNA-polymeraser (T3, T7 eller SP6), umodifiserte eller modifiserte nukleotider, enzymer og passende reagenser.
5' Cap Modification
Sekvensene av modent mRNA fra eukaryocytt viser en 7-metylguanosin (m7G) hette ved 5'-enden, noe som forbedrer mRNA-stabilitet og translasjonseffektivitet. Det er to generelle metoder for å fange mRNA in vitro. For det første kan mRNA dekkes sammen med in vitro-transkript ved å legge til en cap-analog av m7GpppG-strukturen (f.eks. CleanCap) til IVT-systemet. Denne co-transkripsjonelle kapselmetoden gir en naturlig 5' kapselstruktur og øker kapseleffektiviteten til nesten 90-99%. For det andre kan mRNA-kartlegging også oppnås ved å kartlegge enzymreaksjoner etter in vitro-transkripsjonsreaksjonen.
PolyA-modifikasjon
Poly(A)-hale forlenger også halveringstiden til mRNA in vivo og forbedrer mRNA-translasjonseffektiviteten. Lengden på den amplifiserte poly(A) halen skal være 100-300 nukleotider. I tillegg øker modifisert adenosin stabiliteten til poly A-halen mot cellulær RNase-nedbrytning. Poly A-hale kan settes inn ved in vitro-transkripsjon ved bruk av DNA-template som koder for poly A, og dermed resultere i en spesifikk poly A-sekvenslengde. Rekombinant poly A-polymerase kan også brukes ved enzymatisk polyadenylering etter mRNA-transkripsjon.
Nukleotidmodifikasjon
Modifiserte nukleosider kan hemme gjenkjennelse og/eller aktivering av mønstergjenkjenningsreseptorer (PRR) og øke effektiviteten til mRNA-vaksiner på to helt forskjellige måter. tillegg av visse kjemisk modifiserte nukleosider inkludert pseudouridin (ψ), 1-metylpseudouridin (m1ψ), tiouridin (s4U) og 5-metylcytosin (m5C) kan forhindre aktivering av TLR7/8 og andre medfødte immunreseptorer, noe som reduserer immunogenisiteten betydelig. av mRNA.
mRNA leveringssystem
For å opprettholde funksjonen til mRNA, må det gå inn i vertscytoplasmaet og uttrykke spesifikke antigener. En av de vanskeligste utfordringene for mRNA-vaksiner og -terapi ligger i å levere mRNA til målceller med tilstrekkelig høye translasjonsnivåer til at det krever svært spesifikke og effektive mRNA-leveringssystemer. Flere mRNA-leveringsvektorer er utviklet og brukt, inkludert dendritiske celler (DC), protamin, kationiske polymerer og kationiske liposomer.
Komplekser av kationiske lipider med mRNA og andre preparater kan kollektivt danne 80-200 nm store nanopartikler kalt lipid nanopartikler (LNP). Som et av de mest avanserte mRNA-leveringssystemene inkluderer LNP ioniserbare kationiske lipider, naturlige fosfolipider, kolesterol og polyetylenglykol (PEG). Flere RNA-vaksiner og terapier (siRNA og mRNA) godkjent av US Food and Drug Administration er basert på LNP-leveringssystemer.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr One-Stop-løsning for RNA
Tilpassede leveranser
|
Klasse
|
leveransen
|
Spesifikasjon
|
Applikasjoner
|
|
ikke-GMP
|
Legemiddelstoff, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Preklinisk forskning som celletransfeksjon, Analytisk metodeutvikling, Pre-stabilitetsstudier, Formuleringsutvikling
|
|
Medikamentprodukt, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitet
|
Legemiddelstoff, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Undersøkende nytt medikament (IND), autorisasjon for klinisk utprøving (CTA), forsyning av kliniske forsøk, søknad om biologisk lisens (BLA), kommersiell forsyning
|
|
Medikamentprodukt, LNP-mRNA
|
5000 hetteglass eller ferdigfylte sprøyter/ampuller
|
NO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
