Plasmid DNA, som i vitro transkripsjon (IVT) mal, er en viktig råvare for mRNA-produksjon. Høy avkastning, høy renhet og høy gjenopptakelse av plasmid DNA er det viktigste mål under utviklingen av plasmidprosessen.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr en fullstendig løsning for plasmidutvikling, inkludert oppstrøms (fermentasjon), nedstrøms (rensete) prosessutvikling, prosesskarakterisering og prosessvalidering. Vi har omfattende erfaring med å forbedre plasmidavkastningen og isolere den fra komplekse matriser ved å utvikle og optimalisere fermentasjons-, renhets- og fjerningsprosesser for ukeddelser.
Grunnleggende bioprosess for plasmidproduksjon inkluderer: Escherichia coli (E. coli) fermentasjon, cellehenting og alkalisk lysing, klarifisering, kontralisering, tre-trinns kromatografiprogress (fangst, mellomrenhet, og polering), og kontralisering.
Tjenestedytninger | Enhetsoperasjoner | Parametre |
E. coli fermentasjonen |
Rysteflask | Mediekomposisjoner, antibiotika, innsømningsvolum, veksttemperatur og andre. |
Fermentor (7 L) |
Antibiotika, innsømningsvolum, veksttemperatur, pH, oppløst oksygen (DO), matemodus (f.eks., fed-batch), matsmidler, fermentasjonstid og andre. |
|
Cellehenting | Mikrofiltrering | Standard E. coli hentingsprosess |
Cellelyse | Celleoppheving, alkalisk lysning, neutralisering | Alkali-forhold, lysningstid |
Klarhet | Filtrering | Råfiltrering, 20 µm og en 5 µm filtreringsrekke (foretrukket) |
Konsekvens | Ultrafiltrering, tangentialstrømsfiltrering | Pore størrelse (eller NMWC), Transmembrantrykk (TMP), Flux, forholdet mellom filtratvolum og membranareal |
Tre-trinns kromatografi | Størrelsesutskillelseskromatografi (SEC), eller gelfiltreringskromatografi (GFC) | Søjlelengde og diameter, buffer-sammensetning, injeksjonsvolum, mobile fasessammensetning (adsorpsjon og desorpsjon), pH, strømfart, utjevning, binding, vasking og elueringforhold. |
Afinikkromatografi (AF) | ||
Anion-vekselkromatografi (AEX) | ||
Konsekvens | Ultrafiltrering, tangentialstrømsfiltrering | Pore størrelse (eller NMWC), Transmembrantrykk (TMP), Flux, forholdet mellom filtratvolum og membranareal |
Flere løsninger for reningsprosess av biologiske stoffer |