I forhold til den to-trinns enzymatiske lukkingsmetoden kan den ene-trinns ko-transkripsjonelle lukkingsmetoden redusere prosessflyten betydelig. Metoden er resultatorientert og involverer tillegg av cap-analoger til den in vitro transkripsjonsreaksjonen (IVT). Cap-analoger kan introduseres allerede fra starten av transkripsjonen, og mRNA med cap-struktur kan oppnås ved fullføring av transkripsjonen. De nåværende tredjegenerasjons cap-analogene kan unngå omvendt luke og legge til Cap 1-struktur direkte på transkripsjonsproduktet.
Ved å ta hensyn til mRNA sin in vivo immunogenitet og oversettelsesnøyaktighet, bruker IVT-prosessen ofte visse typer modifiserte NTP'er, og vanlige modifiserte nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-metylcytosin (5mC).
Figur: Diagram over mRNA koh-overskrivnings- og toppingsreaksjon
Tjenestedytninger
Tjeneste |
Tjenestedytninger |
Leveringsperiode (arbeidsdag) |
Koh-overskrivningstopping |
In vitro-transkripsjonsrespons (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikasjoner (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Fjerne DNA-mal (DNase I) |
Optimering av IVT-betingelser - valgfritt |
Design og optimering av reaksjonskomponenter |
3-7 |
Våre funksjoner
- Diversifiserte Nukleotidmodifiseringsstrategier
Flere valgbare nukleotidmodifiseringsstrategier kan forbedre proteinettrykk.
Oppnå et høyt transkripsjonsforhold og høy dekkningseffektivitet.
Oppnå en dekkningsrate på mer enn 95%.
Forhindre degradasjon av mRNA effektivt ved å kontrollere strengt RNase i eksperimentell miljø og forbruksgoder.
Casestudie
Yaohai Bio-Pharma har bygget opp en moden plattform for samtidig dekkning under transkription, ved å bruke rene dekk-analoger for å legge til Cap1-struktur direkte samtidig som man unngår omvendt dekkning. Etter standardisert prøveforbehandling og kapillær-elektroforese (CE) deteksjon, kan dekkningsraten av den utvidede grønne fluoreserende protein (eGFP) mRNA oppnå mer enn 95%.
dekkings-effektivitet av eGFP mRNA på mer enn 95%
EGFP-mRNA og mCherry-mRNA, som er forberedt ved kofranskripsjonssluting, transfekteres henholdsvis i 293T-celler, og en sterke fluoresentsignal observeres etter 48 timer, noe som tyder på at mRNA-er effektivt uttrykkes i 293T-celler.
Uttrykk av eGFP-mRNA og mCherry-mRNA i 293T-celle
NO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
