Cirkulær mRNA (circRNA) har blitt brukt mye i studier av gener eller proteinkjeder. Samtidig er den populær i utviklingen av forebyggende og terapeutiske biologiske produkter, lignende mRNA.
Yaohai Bio-Pharma har etablert en rekke circRNA-synteseteknologier for å tilby høykvalitets RNA, som sekvensdesign og -optimalisering, in vitro-transkription (IVT), sirkuleringsprosess, renasjon og lipidnanopartikkel (LNP)-innpakking. Alle produkter frigjøres under strikte kvalitetskontrollstandarder (QC).
I forhold til lineær mRNA er cirkulær RNA (circRNA) mer stabilt i strukturen og er et hovedfokusområde i dagens forskning på nukleinsyresmedicin. Det har en bred vifte av anvendelser innen forskjellige felt, uansett om det er kodende circRNA eller ikke-kodende circRNA, inkludert forebyggende vaksiner mot smittsomme sykdommer, terapeutiske kreftvaksiner, terapeutiske kreftmedisiner, proteinkvalifiserende terapi, regenerativ medisin, celle- og geneterapi (CGT), molekylær spounge rolle og RNA aptamer.
Prosess | Valgfritt tjeneste | Tjenestedytninger | Leveringsperiode (Dager) |
design og optimalisering av circRNA-sekvens | Design og optimering av kodesekvenser | CDS codon-optimering | 1 |
Design og optimering av ikke-kodende sekvenser | Intron og eksongsekvens, homolog arm og avstandsgiver design og optimalisering | 1-2 | |
Forberedelse av sirkulær plasmid | Genesynthese | Genesynthese (Tredjepart) | 7-10 |
Plasmidforstørring | Plasmidforstørring | 2 | |
Plasmiduttrekking | |||
Forberedelse av linearisert plasmid | Plasmidlinjarisering og -renasjon | Plasmidlinearisering | 1 |
Renasjon av linearisert DNA | |||
In vitro-transkription og syklisering | In vitro-transkription og syklisering | Reaksjoner for in vitro-transkription og syklisering | 1-2 |
RNase R-fordøyning | |||
Optimering - valgfri | Reaksjonsoppsett, Tidsoptimering | 2-5 | |
circRNA Renhetstesting | Konvensjonell renningsmetode | Lithiumklorid nedsetting | 1 |
Rengjøring med magnetiske partikler | 1 | ||
Høygradig rent circRNA-renning | Preparativ høytrykksvæskeseparasjon (HPLC) | 1-2 | |
Buffertutveksling | Ultrafiltrering | 1 | |
circRNA Lyofilisering | Prøvesetting | Fylling | 2-3 |
Lyofilisering | Forfrysing | ||
Første tørring (sublimasjon) | |||
Andre tørring (desorpsjon) | |||
circRNA-LNP Inkapsling | LNP Inkapsling | Materiale- og væskeforebehandling | 2 |
Mikrofluidisk enhetsblanding | |||
Buffertutveksling | Tangentiel strømfiltrering | 1 | |
Steril | Filtrering | ||
Kvalitetskontroll av plasmiddna | Konsentrasjon/purettet | Ultraviolet (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plasmid konformasjon | Agarosegelelektroforese (AGE) | ||
Kapillær Elektrofose (CE) - Valgfritt | |||
Plasmid identifisering | Restriksjonsenzyme identifisering/AGE | ||
Kvalitetskontroll av circRNA | Konsentrasjon/purettet | Ultraviolet (UV) Spektrofotometri | - |
Renhet | Agarose Gelelektrofose (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - valgfritt | 1 | ||
Kvalitetskontroll av circRNA-LNP | Inkapslingsnøyaktighet | RiboGreen-metode | 1 |
Partikkelstørrelse | Dynamisk lysstreuing (DLS) | 1 | |
Polydisperositetsindeks | Dynamisk lysstreuing (DLS) | 1 | |
Zetapotensial | Dynamisk lysstreuing (DLS) | 1 | |
Selvbasert effektivitetstest | Selvtransfeksjon | Selvplatering, selvtransfeksjon | 4 |
Måling av målprotein | Fluoresensobservasjon, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Vi transfeksjonerte forsterket grønn fluorescent protein circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA inn i 293T-seller, og oppdagede målprotein gjennom fluoresens, lysende eller farge signal, western blot (WB), enzyme-koblet immunosorbent test (ELISA).
Selvbaserte effektivitetstester av circRNA-prøver av Yaohai Bio-Pharma