Når det gjelder batchpreparering av RNA-forløpere, er en vanlig metode in vitro-transkripsjon (IVT). IVT-reaksjonen bruker linearisert plasmid-DNA som inneholder T7-promotoren som en mal og syntetiserer en RNA-forløper med nukleosidtrifosfater (NTP-er) som et substrat i nærvær av T7 RNA-polymerase.
In vitro cykliseringsmetoder inkluderer kjemisk ligering, enzymatisk ligering og permutert intron-exon (PIE) metode. Kjemisk ligering og enzymatisk ligering er egnet for cyklisering av kortere RNA. Når fragmentet er større enn 100 nt, vil cykliseringshastigheten synke sterkt. I motsetning til dette kan nukleasemetoden basert på PIE-systemet oppnå cyklisering av 8 kb-sekvenser.
Under katalyse av guanosintrifosfat (GTP) gjennomgår PIE-strukturen cyklisering av ekstra-intronsekvenser. Kombinert med en fornuftig strategi for å øke cyclization rate, kan Yaohai Bio-Pharma oppnå cyclization på opptil 4 kb sekvenser, med en cyclization effektivitet på mer enn 80%.
In vitro cykliseringsreaksjonen av RNA flyter som følger:
RNA-forløperen syntetiseres ved in vitro-transkripsjon, og PIE-komponenten fullfører selvspleising under katalyse av GTP for å danne circRNA.
Tjenestedetaljer
| Prosess | Tjenestedetaljer | Leveringsperiode (arbeidsdag) |
| In vitro transkripsjon og sirkulasjon | Bekreftelse av reaksjonssystem | 1-2 |
| In vitro transkripsjon og cykliseringsreaksjoner |
| RNase R fordøyelse |
| Reaksjonsoptimalisering | Reaksjonssammensetning, tidsoptimalisering | 2-5 |
Våre funksjoner
- Streng testdesign og optimalisering
Opptil 4 kb RNA-syklisering kan oppnås.
- Høy cykliseringseffektivitet
En cykliseringsrate på mer enn 80 % kan oppnås gjennom en rasjonell sekvensoptimaliseringsstrategi.
Gjennom streng kontroll av RNaser i det eksperimentelle miljøet og forbruksvarer, forhindres RNA-nedbrytning effektivt.
Case study
In vitro cyklisering og berikelse av circRNA
Basert på PIE-systemet har Yaohai Bio-Pharma optimert sekvensen til circRNA, med en cykliseringshastighet på mer enn 80 % ved agarosegelelektroforese (AGE). Ved å bruke RNase R for å berike circRNA, viser E-gelelektroforeseresultater at den lineære RNA-forløperen er fordøyd, og etter ytterligere rensing kan det meste av circRNA med hakk fjernes. Renseløsningen er egenutviklet av Yaohai Bio-Pharma.
In vitro sirkulasjon og berikelse av circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
