Angående batchforberedelse av RNA-forløpere, er en vanlig brukt metode in vitro transkripsjon (IVT). IVT-reaksjonen bruker linearisert plasmiddna som inneholder T7-promotoren som mal og syntetiserer et RNA-forløper med nukleosidtrifosfat (NTP) som substrat i tilstedeværelse av T7 RNA-polymerase.
In vitro-sirkulasjonsmetoder inkluderer kjemisk ligasjon, enzymatisk ligasjon og permuted intron-exon (PIE)-metode. Kjemisk ligasjon og enzymatisk ligasjon er egnet for sirkulasjon av kortere RNAs. Når fragmentet er større enn 100 nt, vil sirkulasjonsfrekvensen synke kraftig. I motsetning til dette kan nuclease-metoden basert på PIE-systemet oppnå sirkulasjon av sekvenser på 8 kb.
Under katalyse av guanosintrifosfat (GTP) går PIE-strukturen gjennom syklisering av ekstra-intron-sekvenser. Kombinert med en rimelig strategi for å øke sykliseringshastigheten, kan Yaohai Bio-Pharma oppnå syklisering av sekvenser på inntil 4 kb, med en sykliserings-effektivitet på mer enn 80%.
Sykliseringsreaksjonen av RNA i vitro foregår som følger:
RNA-forløperen sintetiseres ved in vitro-transkription, og PIE-komponenten fullfører selv-splicing under katalyse av GTP for å danne circRNA.
Tjenester detaljer
| Prosess |
Tjenestedytninger |
Leveringsperiode (arbeidsdag) |
| In vitro Transkription og Sirkulasjon |
Bekreftelse av reaksjonsystem |
1-2 |
| Reaksjoner for in vitro-transkription og syklisering |
| RNase R-fordøyning |
| Reaksjonsoptimalisering |
Reaksjonsoppsett, Tidsoptimering |
2-5 |
Våre funksjoner
- Strikt testdesign og optimering
Opptil 4 kb av RNA-syklisering kan oppnås.
- Høy sykliserings-effektivitet
En sykliseringsrate på mer enn 80% kan oppnås gjennom en rasjonell sekvensoptimeringsstrategi.
Gjennom strikt kontroll av RNases i eksperimentelt miljø og forbruksgoder, forhindre effektivt degradasjonen av RNA.
Casestudie
In vitro syklisering og bereikning av circRNA
Basert på PIE-systemet har Yaohai Bio-Pharma optimert sekvensen til circRNA, med en sykliseringsrate på mer enn 80% ved agarosegelelektroforese (AGE). Ved å bruke RNase R for å bereike circRNA viser E-gel-elektroforese-resultatene at den lineære RNA-forløperen blir fordypet, og etter videre renasjon fjernes det meste av klippet circRNA. Renasjonsløsningen er selvutviklet av Yaohai Bio-Pharma.
In vitro sirkulasjon og bereikning av circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
