5'-endekapping er en essensiell modifikasjon av mRNA. mRNA-er med cap-strukturer, spesielt Cap1-strukturer, letter mRNA-er som unngår medfødte immunresponser in vivo, noe som resulterer i effektiv proteintranslasjon.
Enzymatisk kapping (to-trinnsmetoden) er den konvensjonelle metoden for mRNA-begrensning, lik kappingsprosessen i eukaryote organismer. Under påvirkning av en rekke enzymer blir 7-metylguanin (m7G) koblet til 5'-enden av mRNA gjennom en 5'-5' trifosfatbinding og gjennomgår metyleringsmodifisering for å danne cap-strukturen Cap 1 (m7GpppN).
Diagram over dannelse av naturlig hettestruktur
Den enzymatiske kappingsreaksjonsstrømmen er som følger:
Linearisert plasmid-DNA brukes som en mal for in vitro-transkripsjon (IVT) i nærvær av T7-polymerase, og mRNA med en 5'-endekaps-struktur dannes etter en ett-trinns rensing ved bruk av vaccinia-kappingsenzymet og 2'-O -metyltransferase.
Tjenestedetaljer
Valgfri tjeneste |
Tjenestedetaljer |
Leveringsperiode (dag) |
mRNA enzymatisk kapping |
Enzymatisk capping-reaksjon |
1 |
Optimalisering av avslutningsreaksjon - valgfritt |
Reaksjonskomponentdesign og optimalisering |
3 ~ 7 |
Våre funksjoner
- Design og optimalisering av capping-reaksjonskomponenten
Avslutningsreaksjonskomponenten er optimalisert, og produksjonen av mRNA-transkript økes kraftig.
- In vitro ekspresjonsverifisering
Det avdekkede mRNA blir transfektert inn i 293T-celler, og ekspresjonen av målproteinet kan påvises.
Gjennom streng kontroll av RNaseson-eksperimentmiljøet og forbruksvarer, forhindres mRNA-nedbrytning effektivt.
Case study
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-plattform har bygget en perfekt avgrensningsreaksjonsprosess.
For eGFP-mRNA, et mRNA-preprodukt fremstilt ved enzymatisk kapping, kan et eGFP-fluorescenssignal (grønn fluorescens) på et høyt nivå observeres etter transfeksjon av 293T-celler i 24 timer, som påvises av Western Blot (WB), som viser at målproteinforsterket grønt fluorescerende protein (eGFP) kan uttrykkes effektivt in vitro.
Ekspresjon av enzymatisk avkortet eGFP-mRNA i 293T-celle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
