CircRNA-preparering krever lineært RNA som forløpermateriale (RNA-forløper) for cyklisering, hvor RNA-forløperen vanligvis fremstilles ved bruk av linearisert plasmid-DNA som transkripsjonsmal og transkribert in vitro ved hjelp av T7 RNA-polymerase.
Plasmid-DNA av høy kvalitet er avgjørende for in vitro-transkripsjon (IVT). Basert på den modne plasmidprepareringstjenesteplattformen, kan Yaohai Bio-Pharma tilby en høy renhet og standard linearisert plasmid DNA (pDNA) forberedelsestjeneste for å sikre integriteten til IVT-produkter.
Tjenestedetaljer
| Prosess |
Valgfri tjeneste |
Tjenestedetaljer |
Leveringsperiode (arbeidsdag) |
| Sirkulært plasmidpreparat |
Gensyntese |
Gensyntese (tredjepart) |
7-10 |
| Plasmidamplifikasjon |
Plasmidamplifikasjon |
2 |
| Plasmidekstraksjon |
| Linearisert plasmidpreparat |
Plasmid linearisering og rensing |
Plasmid linearisering |
1 |
| Linearisering DNA-rensing |
| Plasmid DNA kvalitetskontroll |
Konsentrasjonsrenhet |
Ultrafiolett (UV) spektrofotometri |
1-2 |
| Plasmidkonformasjon |
Agarosegelelektroforese (AGE) |
| Kapillærelektroforese (CE) - valgfritt |
| Plasmididentifikasjon |
Restriksjonsenzymidentifikasjon/ALDER |
Våre funksjoner
Fleksibelt utvalg av lineariseringsmetoder
Optimalisering av DNA-ekstraksjon og rensemetoder for å oppnå høye utvinningsgrader.
Strenge prosesskontrollstandarder, med en superhelisk konformasjonsrate av plasmidprøver for forskning på over 80 %.
Høy standard og høy effektivitet plasmid forberedelse og kvalitetskontroll tjenester for å møte eksperimentelle behov.
Case study
Tar vi Yaohai Bio-Pharmas produkt mCherry circRNA som et eksempel, er supercoil-forholdet av transkripsjonsmalplasmidprøver (forskningsgrad) mer enn 70 %, med en lineariseringshastighet på nær 100 %.
mCherry circRNA fremstilles med linearisert plasmid som mal og transfekteres inn i 293T-celler. Høyt nivå av fluorescensekspresjon (rød fluorescens) detekteres etter 24 timers transfeksjon, som vil bli forsterket etter 48 timer, og fortsatt kan detekteres på den 7. dagen og den 14. dagen etter transfeksjonen.
mCherry-protein uttrykkes stabilt og effektivt, og den transkripsjonelle malrenheten kan oppfylle kravet til circRNA-medikamentprodukt (DP) med høy kvalitet.
In vitro ekspresjonsvalidering av mCherry circRNA
NO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
