Nedstrøms prosessutvikling

Mikrobiell CDMO

Betydningen av utvikling av nedstrøms prosess (DSP).

Hele fermenteringsbuljongen inneholder målprotein eller plasmid, samt produkt- og prosessrelaterte urenheter, f.eks. aggregater, mikrobielle cellesubstrater, vertscelleproteiner (HCP), vertscelle-DNA (HCD), endotoksin og antibiotika.

Derfor er det avgjørende å designe en effektiv DSP, renseprosess, for å fjerne visse urenheter og produsere høyrenset og høykvalitets medikamentsubstans. I tillegg kan optimering av renseprosessen bidra til å øke produktgjenvinningen, redusere kostnadene og forbedre prosessskalerbarheten og reproduserbarheten.

Nøkkelord: prosessutvikling, optimalisering og validering, renseprosess, kromatografi, eliminering av urenheter, HCP-fjerning, HCD-eliminering, endotoksinfjerning, proteindenaturering og refolding, VLP-montering, konjugering

Anvendelse: Biofarmasøytisk industri, humanmedisin, dyremedisin, vaksine, rekombinante store molekyler, rekombinante biologiske, biologiske reagenser

DSP-løsninger fra Yaohai Bio-Pharma

Vi har lang erfaring med å isolere målproteiner eller plasmider fra komplekse matriser ved å utvikle og optimalisere nedstrøms renseprosessen. Det finnes ulike typer enhetsoperasjoner egnet for rensing av biologiske stoffer, inkludert sentrifugering, filtrering, homogenisering, alkalisk lysering, ultrafiltrering, utfelling, proteindenaturering og refolding, kromatografi, etc.

Våre tilgjengelige renseutviklingstjenester inkluderer:

Utvikling av hele renseprosessen fra celle- eller supernatantsamling til den endelige aktive ingrediensen.
Optimalisering av renseprosessen basert på produkt- og prosessrelaterte urenheter for å øke produktkvalitet og sikkerhet, f.eks. HCP, HCD, endotoksin.
Definisjon og optimalisering av nøkkelparametere i en eller flere enhetsoperasjoner, inkludert cellelyse, tangentiell strømningsfiltrering, harpiksscreening, kromatografi, proteindenaturering og refolding, etc.
Optimalisering av prosessen når det gjelder kvalitet, utbytte, utvinning, kostnad og skalerbarhet.
Validering av nedstrøms renseprosessen.
Risikobasert parameterområdevurdering og Design of Experiments (DoE) i prosessmodellering.

Tjenestedetaljer

Standardiserte protein- eller plasmidrenseplattformer er basert på flere rårensetrinn og mindre enn 4 kromatografitrinn, inkludert fangst, mellomrensing og polering.

Tjenestedetaljer	Enhetsdrift	parametere
Rå rensing	sentrifugering	Rotasjonshastighet, tid
	Høytrykkshomogenisering	Totalt fast innhold, trykk, sykluser
	Kontinuerlig alkalisk lysis	Forholdet mellom resuspenderte celler og lyseløsning, lysetid
	Tangentiell strømningsfiltrering	Membranmateriale og porestørrelse, matestrømningshastighet transmembrantrykk (TMP), filtratvolum til membranarealforhold
	Nedbør	Utfellingsmiddeltype og konsentrasjon, tilsetningsstoff, pH, temperatur, tid
Denaturering og refolding	Inklusjonskroppsproteinoppløselighet	Denatureringsmiddelkonsentrasjon (f.eks. urea, guanidin-HCl, sterkt ionisk vaskemiddel), vaskemidler (f.eks. natriumdodecylsulfat, SDS), reduksjonsmidler (f.eks. ditiotreitol, DTT), chelateringsmidler (etylendiamintetraeddiksyre, EDTA), temperatur, tid
Denaturering og refolding	Refolding av protein	Refoldingmetoder (fortynning, dialyse eller SEC refolding), proteinkonsentrasjoner, buffere, pH, temperatur, tid, oksidasjons- og reduksjonsmidler (f.eks. glutation, GSH/oksidert glutation, GSSH, DTT/GSSH, cystein/cystin), småmolekylære tilsetningsstoffer (L-arginin, urea, guanidin/HCl og vaskemidler)
Fangst, mellomliggende rensing og polering	AC (affinitetskromatografi)	Flere typer kromatografiharpiks/kolonne (f.eks. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolonnelengde og diameter, buffersammensetning, injeksjonsvolum, mobilfasesammensetning (adsorpsjon og desorpsjon), pH, strømningshastighet, binding, Vaske- og elueringsbetingelser.
	IEX (anion- eller kationbyttekromatografi)
	HIC (hydrofobisk interaksjonskromatografi)
	Avsalting og/eller størrelseseksklusjonskromatografi (SEC)
	RPC (Reversed Phase Chromatography)
	MMC, blandet modus kromatografi

Case study

Sak 1

Vi får i oppdrag å utvikle og optimalisere nedstrøms renseprosessen for å øke proteinrenheten fra 85 % til 90 % samtidig som kromatografitrinnene reduseres.

Yaohai leverte en robust og skalerbar renseprosess med 3-trinns kromatografi for målproteinet, en bakteriell allergi. Og den endelige renheten nådde 95%.

Sak 2

Yaohai ble oppnevnt av vår klient for å optimalisere endotoksinfjerningsprosessen til den viruslignende partikkelvaksinen (VLP).

Teamet vårt utførte kromatografiparameteroptimalisering og forberedte en medikamentsubstans med en renhet på 98 % og endotoksinrest på 12.8 EU/mg.

Våre erfaringer

Vi har vært involvert i utvikling og produksjon av forskjellige store molekyler, inkludert rekombinante underenhetsvaksiner, VLP-er, hormoner (insulin, GLP-1, veksthormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), vekstfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanobodies/enkeltdomene antistoffer (sdAbs), enzymer, etc.

Utstyr

Vi bruker industriledende AKTA Pure, AKTA Avant og Preparative HPLC-systemer for å utføre ulike kromatografimetoder, inkludert affinitet, ionebytting, hydrofob interaksjon, omvendt fase og størrelseseksklusjonskromatografi.

Alle Kategorier

Nedstrøms prosessutvikling

Mikrobiell CDMO