Rekombinante proteiner ser ofte oxidasjon av eksponerte aminosyresidgrupper, som tryptofan (Trp) og metionin (Met), som endrer fysikkemiske egenskaper ved proteinene. Disse endringene kan på sin tur bidra til å endre de biologiske funksjonene til de berørte proteinene, for eksempel tap av binding, reduksjon av enzymaktivitet, uventet rask renning. Protein er viktige mål for oksidative reaksjoner fordi de reagerer raskt med oksidanter og er abundante i celler, ekstrasellulære tettet og kroppsvæsker.
Derfor er overvåking av proteinoksidasjon avgjørende for vellykket utvikling av biomedisiner.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr analyse av aminosyrekseksidasjon, som lar deg bestemme aminosyrokisdasjonen ved hjelp av Væskekjromatografi-Massespekstroskopi (LC-MS).
Vi har vært in involvert i Proteinstrukturkarakterisering av ulike store molekyler, herunder Rekombinant Subunit Vaksiner, Nanobodyer/VHHs/Single-domain antibodies (sdAbs), Antibodyfragmenter, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Vekstfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener, osv.
Reguleringskrav for Aminosyranoksidasjon
I henhold til ICH Q6B-retningslinjene kan oksiderte former oppdages og karakteriseres ved kromatografiske, elektroforetiske og/eller andre relevante analytiske metoder (f.eks., Høy Ytelse Væskeskiltning (HPLC), kapillær-elektroforese, massespektroskopi, sirkulær dikroism).
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Aminosyran oksidasjon |
LC-MS, Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) eller Hydrophobic Interaction Chromatography High Performance Liquid Chromatography (HIC-HPLC) og massespektroskopi |
Analytiske Prosedyrer
1. Prøveforberedelse
2. LC-MS
3. Dataanalyse
Tryptophan (Trp)-aminosyrene er spesielt oppfatte for oksidasjon grunnet den høye reaktiviteten til det aromatiske indolringet med reaktive syrearter. Trp-oksidasjon krever at Trp-aminosyrene har noen eksponering som vanligvis er inngravert i den tredimensjonale strukturen av proteinet.
Imidlertid, når Trp-aminosyrene blir oksidert, kan de transformeres til en rekke produkter med helt andre egenskaper enn det opprinnelige Trp. Den vanligste veien for Trp-oksidasjon inkluderer formingen av N-formylkinurenin (Massedifferanse: +32).
En annen ofte oksidert aminosyre er methionine. Sulfuratomet i Met-residuet kan akseptere enten en eller to oksygenatomer, noe som fører til formingen av sulfoxid (Massedifferanse: +16) eller sulfon (Massedifferanse: +32), tilsvarende. Denne modifikasjonen er relativt vanlig på grunn av Metens typisk høy overflateeksponering.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
