Væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) baserte peptidkartleggingsdata vil gi en stor mengde informasjon om primær- og høyereordensstrukturen til native og rekombinante proteiner, inkludert aminosyresekvensdekning, post-translasjonelle modifikasjoner (PTM-er, f.eks. glykosylering) , oksidasjon, deamidering), disulfidbindinger, etc.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr peptidkartleggingsanalysetjenester for målproteinet ditt av LC-MS, for å fremskynde forskningen din på proteinstruktur.
Vi har vært involvert i proteinstrukturkarakterisering av forskjellige store molekyler, inkludert rekombinante underenhetsvaksiner, nanostoffer/VHHs/ enkeltdomene antistoffer (sdAbs), antistofffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vekstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav for peptidkartlegging
ICHQ6B-retningslinjen anbefaler: "Selektiv fragmentering av produktet til diskrete peptider utføres ved bruk av egnede enzymer eller kjemikalier, og de resulterende peptidfragmentene analyseres ved HPLC eller annen passende analytisk prosedyre. Peptidfragmenter bør identifiseres så langt som mulig ved bruk av teknikker som aminosyresammensetningsanalyse, N-terminal sekvensering eller massespektrometri (MS). Peptidkartlegging av det aktive stoffet eller legemiddelproduktet (DP) ved bruk av en hensiktsmessig validert metode er en metode som ofte brukes for å bekrefte ønsket produktstruktur for batchfrigivelse.»
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Peptidkartlegging |
Proteasefordøyelse og væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) |
Analytisk prosedyre
1. Reduksjon og alkylering
Hensikten er å redusere disulfidbroer og blokkere den genererte frie tiolen. Reduksjon av disulfidbroer bidrar til å åpne proteinstrukturen som gjør den proteolytiske fordøyelsen mer effektiv. Dette trinnet vil også bryte broene mellom kjedene i tilfelle av flerkjedede proteiner som har disulfidbroer som forbinder kjedene (f.eks. monoklonale antistoffer, mAbs).
2. Fordøyelse av proteinet ved hjelp av enzymer
Hensikten er å bryte proteinet ned til peptider. Vi valgte enzymene basert på den teoretiske sekvensen til proteinet og kunnskapen om teoretisk fordøyelse av proteinet av enzymer. Hvis du velger enzymer på denne måten, bør det resultere i den beste peptidkartleggingsanalysen.
3. Analyse av de fordøyde peptider Bruke online omvendt fase-høyytelses væskekromatografi med ultrafiolett (UV) og elektrospray-massespektrometrisk deteksjon (LC/ES-MS).
Peptidseparasjon basert på polaritet ved bruk av LC (omvendt fase-LC)
Når peptidet eluerer fra LC-kolonnen, vil massespektrometeret generere masseinformasjon sammen med fragmentioninformasjon, som lar oss bestemme sekvensinformasjonen. Vi bruker sekvensinformasjonen til å bekrefte peptididentitet og gi primærinformasjon.
Vi kan også generere fragmenteringsinformasjonen fra peptidene når de kommer inn i massespektrometerkilden fra LC-kolonnen. Avhengig av kravene til studiet er dette enten selektiv LC-MS/MS eller ikke-selektiv, som kan betraktes som en form for tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
