N-glykanprofilering er avgjørende for produksjon av biofarmasøytiske midler. Yaohai Bio-Pharma tilbyr N-glykan profileringstjeneste ved bruk av væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) av frigjorte og merkede glykaner. De generelle trinnene for å tilberede N-glykanprøver inkluderer fordøyelse av glykoproteinet (GP), deglykosylering, rensing, merking/derivatisering og Solid Phase Extraction (SPE).
Vi har vært involvert i proteinstrukturkarakterisering av forskjellige store molekyler, inkludert rekombinante underenhetsvaksiner, nanostoffer/VHHs/ enkeltdomene antistoffer (sdAbs), antistofffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vekstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav for N-Glycan-profilering
I følge ICH Q6B-retningslinjen, "for glykoproteiner bestemmes karbohydratinnholdet (nøytrale sukkerarter, aminosukker og sialinsyrer). I tillegg analyseres strukturen til karbohydratkjedene, oligosakkaridmønsteret (antennær profil) og glykosyleringsstedet(e) til polypeptidkjeden i den grad det er mulig.
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| N-glykan profilering |
Væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) analyse av frigjorte og merkede glykaner |
prosedyrer
1. Enzymatisk glykanfrigjøring med peptid N-glykosidase F (PNGase F)
2. Derivatisering av frigjorte glykaner med 2-aminobenzamid (2-AB)
3. Rensing av de høstede N-glykanene på en TSK Amide - 80 kolonne hvis store mengder vaskemidler, ikke-flyktige salter eller materialer med frie aminogrupper er tilstede
4. Merking med fluorescerende 2-aminobenzamid (2-AB)
5. LC-MS analyse av merkede N-glykaner
6. Dataanalyse
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
