N-glykosyleringsplassbruk er en fysiologisk egenskap ved glykoproteiner og produserer hovedsakelig N-glykan. Yaohai Bio-Pharmas tjeneste for analyse av N-glykosyleringsplassbruk gjennomføres ved fordøyning, frigjengelse, oppkonsentring og analyse ved hjelp av Væskestyrt Kromatografi-Elektrospray-Ionisering Massespekstometri-Massespekstometri (LC-ESI-MS/MS).
Vi har vært in involvert i Proteinstrukturkarakterisering av ulike store molekyler, inkludert Rekombinant Subunit Vaksiner, Nanokropper/VHHs/Enkeldomeneantikropp (sdAbs), Antikroppfragmenter, Hormoner/Peptider, Sytokiner, Vekstfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener, osv.
Reguleringskrav for N-glykosyleringsplassbruk
I henhold til ICH Q6B-retningslinje, «for glykoproteiner bestemmes karbohydrathalvmen (nøytrale sukker, aminosukker og sialinsyurer). Videre analyseres strukturen på karbohydratkjedene, oligosukkermønsteret (antenneprofilen) og glykosyleringssiden(e) av polypeptidkjeden i størst mulig utdypning.»
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| N-glykosylering sideopptak |
LC-MS etter deglykosylase- og protease-fordeling |
Prosedyrer
1. Proteinfordeling for å generere små peptidsnitte.
2. Frigjøring av N-glykaner ved bruk av endoglykosidase H eller PNGase F. Endoglykosidase H klipper båndet mellom de to GlcNAc-residyene i kjernen av N-lenkeglykaner, mens PNGase F er en glykoamidase som kutter båndet mellom GlcNAc og Asn, frigjør hele sukkerkjeden og konverterer Asn til Asp med masseøkning på 1-Da.
3. Oppretting av N-glycopeptider via HILIC (Hydrofyl Interaksjon Væskeskromatografi)
4. Analyse av besettelse av N-lenkeglykosyleringssider ved bruk av LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
