Opptak av N-glykosyleringssted er et fysiologisk trekk ved glykoproteiner og produserer hovedsakelig N-glykan. Yaohai Bio-Pharmas N-glykosyleringssted-beleggsanalysetjeneste utføres gjennom fordøyelse, frigjøring, berikelse og analyse ved bruk av væskekromatografi-elektrosprayionisering massespektrometri-massespektrometri (LC-ESI-MS/MS).
Vi har vært involvert i proteinstrukturkarakterisering av forskjellige store molekyler, inkludert rekombinante underenhetsvaksiner, nanostoffer/VHHs/ enkeltdomene antistoffer (sdAbs), antistofffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vekstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav til N-glykosyleringssted
I følge ICH Q6B-retningslinjen, "for glykoproteiner bestemmes karbohydratinnholdet (nøytrale sukkerarter, aminosukker og sialinsyrer). Videre analyseres strukturen til karbohydratkjedene, oligosakkaridmønsteret (antennær profil) og glykosyleringsstedet(e) til polypeptidkjeden i best mulig grad."
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| Opptak av N-glykosyleringssted |
LC-MS etter diglykosylase og proteasefordøyelse |
prosedyrer
1. Proteinfordøyelse av proteiner for å generere små peptidfragmenter.
2. N-glykanfrigjøring ved bruk av endoglykosidase H eller PNGase F. Endoglykosidase H spalter bindingen mellom de to GlcNAc-restene i kjernen av N-koblede glykaner, mens PNGase F er en glykoamidase som bryter bindingen mellom GlcNAc og Asn, og frigjør hele sukkerkjede og konvertere Asn til Asp med masseøkning på 1-Da.
3. N-glykopeptidanrikning via HILIC (hydrofil interaksjonsvæskekromatografi)
4. Analyse av N-koblet glykosyleringsstedbeslag ved bruk av LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
