Sintesis mRNA di Luar Tubuh
Komponen utama mRNA adalah 5’-cap, 5’-UTR, kerangka baca terbuka (ORF), 5’-UTR, dan ekor poli A 5’, yang semuanya penting untuk memelihara fungsi mRNA. Penyelidik telah menggunakan pelbagai kaedah untuk mengenal pasti dan mengoptimumkan urutan dan struktur mRNA.
Sintesis mRNA dilakukan berdasarkan transkrip in vitro (IVT) menggunakan templat DNA linear, polimerase RNA (T3, T7, atau SP6), nukleotida tidak dimodifikasi atau dimodifikasi, enzim, dan reagen yang sesuai.
penyesuaian Cap 5'
Jujukan mRNA matang dari eukariot menunjukkan topi 7-metilguanosin (m7G) di hujung 5', yang meningkatkan kestabilan mRNA dan kecekapan translasi. Terdapat dua kaedah am untuk menangkap mRNA dalam ujian cawan. Pertama, mRNA boleh ditutup semasa transkripsi in vitro dengan menambahkan analog topi berstruktur m7GpppG (contohnya, CleanCap) kepada sistem IVT. Kaedah penutupan bersama-sama ini memberikan struktur kapsul 5' yang alamiah dan meningkatkan kecekapan penutupan kepada hampir 90-99%. Kedua, pemetaan mRNA juga boleh dilakukan melalui tindak balas enzim selepas reaksi transkripsi in vitro.
Penyesuaian PolyA
Ekor poly(A) juga memanjangkan separuh hayat mRNA dalam keadaan in vivo dan meningkatkan kecekapan terjemahan mRNA. Panjang ekor poly(A) yang dikuatkan sepatutnya antara 100-300 nukleotida. Selain itu, adenosin yang dimodifikasi meningkatkan kestabilan ekor poly A terhadap penguraian oleh RNase selulair. Ekor Poly A boleh disisipkan melalui transkripsi in vitro menggunakan templat DNA yang mengandungi pola poly A, dengan itu menghasilkan panjang urutan poly A tertentu. Polimerase poly A rekombinan juga boleh digunakan untuk poliadenasi enzimatik selepas transkripsi mRNA.
Pemodifikasian Nukleotida
Nukleosida yang dimodifikasi boleh menghalang pengenalan dan / atau pengaktifan penerima pola (PRR) serta meningkatkan keberkesanan vaksin mRNA dengan dua cara yang sama sekali berbeza. Penambahan nukleosida kimia tertentu termasuk pseudouridine (ψ), 1-methylpseudouridine (m1ψ), thiouridine (s4U) dan 5-methylcytosine (m5C) boleh mencegah pengaktifan TLR7/8 dan penerima imun bawaan lain, yang secara signifikan mengurangkan immunogeniciti mRNA.
sistem Penghantaran mRNA
Untuk mengekalkan fungsi mRNA, ia perlu memasuki sitoplasma hos dan menyatakan antigen spesifik. Salah satu cabaran yang paling sukar yang dihadapi oleh vaksin mRNA dan terapi mRNA adalah menghantar mRNA ke dalam sel sasaran dengan tahap penterjemahan yang cukup tinggi, yang memerlukan sistem penghantaran mRNA yang sangat spesifik dan cekap. Beberapa vektor penghantaran mRNA telah dibangunkan dan digunakan, termasuk sel dendritik (DCs), protamine, polimer kationik, dan liposom kationik.
Kompleks lipid kationik dengan mRNA dan persiapan lain boleh membentuk secara kolektif nanopartikel saiz 80-200 nm yang dikenali sebagai nanopartikel lipid (LNPs). Sebagai salah satu sistem penghantaran mRNA yang paling canggih, LNP merangkumi lipid kationik yang boleh dionisikan, fosfolipid semula jadi, kolesterol dan polietilen glikol (PEG). Beberapa vaksin RNA dan terapi (siRNA dan mRNA) yang diluluskan oleh Pentadbiran Makanan dan Drug Amerika Syarikat adalah berdasarkan sistem penghantaran LNP.
Yaohai Bio-Pharma Menawarkan Penyelesaian Satu Henti untuk RNA
Hasil Tersuai
|
Gred
|
Hasil Kerja
|
Spesifikasi
|
Aplikasi
|
|
bukan-GMP
|
Bahan Farmaseutikal, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Penyelidikan praklinik seperti transfeksi sel, Pembangunan kaedah analisis, Kajian prestabiliti, Pembangunan formulasi
|
|
Drug Product, LNP-mRNA
|
|
GMP, Steriliti
|
Bahan Farmaseutikal, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Ubat percubaan baharu (IND), Pembenaran ujian klinikal (CTA), Pasokan ujian klinikal, Permohonan lesen biologi (BLA), Pasokan dagangan
|
|
Drug Product, LNP-mRNA
|
5000 bikal atau silinder sulit/ kartrij
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
