MRNA:n in vitro -synteesi
MRNA:n pääasialliset komponentit ovat 5’-kappale, 5’-UTR, avoin lukukoodi (ORF), 5’-UTR ja 5’ poly A hännä, jotka ovat välttämättömiä mRNA-funktion ylläpitämiseksi. Tutkijat ovat käyttäneet monia menetelmiä tunnistaa ja optimoida mRNA-sekvenssejä ja rakenteita.
MRNA:n synteesi suoritetaan in vitro -transkriptioon (IVT) perustuen lineaarisiin DNA-malleihin, RNA-polymeraaseihin (T3, T7 tai SP6), muokattuihin tai epämuokatuksiin nukleotideihin, enzyymeihin ja sopiviin reagentteihin.
5’ Kappaleen muokkaus
Kehittyneiden mRNA-akselien järjestelmät näyttävät 7-metyyliinosiinikappaleen (m7G) kappaleen 5’ päässä, mikä parantaa mRNA:n vakautta ja käännöksen tehokkuutta. On olemassa kaksi yleistä menetelmää mRNA:n kiinnitykseen in vitro. Ensimmäiseksi mRNA voi olla kappaloinen myös in vitro -transkriptiolla lisäämällä kappaleanalogia m7GpppG-rakenteeseen (esim. CleanCap) IVT-järjestelmään. Tämä ko-transkriptionaalisesta kappaleen menetelmä tarjoaa luonnollisen 5' kapseli-rakenteen ja nostaa kappaleen tehokkuuden lähes 90-99%. Toiseksi mRNA-karttaprosessit voidaan toteuttaa kartta-ensiimereaktioissa in vitro -transkriptioon seuraavasti.
PolyA Muokkaus
Poly(A) häntä lisää myös mRNA: n puolieloon elinkaaren in vivo ja parantaa mRNA: n käännöksen tehokkuutta. Amplifioitua poly(A) häntää tulisi olla 100-300 nukleotiidi pitkä. Lisäksi muunnettu adenosni kasvattaa poly A hännän vakautta vastaan solullisten RNasen hajoamisen. Poly A häntä voidaan lisätä in vitro -transkriptiossa käyttämällä DNA-mallia, joka koodaa poly A: ta, mikä johtaa tiettyyn poly A sekvenssin pituuteen. Recombinant poly A polymerasi voidaan myös käyttää enzymimaaraisessa polyadenylointiassa mRNA:n transkription jälkeen.
Nukleotiidien muunnos
Muunnetut nukleosidit voivat estää kaavio tunnistusreseptorien (PRR) tunnistuksen ja/taikka aktivoituksen sekä parantaa mRNA-rokotteiden tehokkuutta kahdella täysin erilaisella tavalla. Tiettyjen kemikaalisen muunneltujen nukleosidien, mukaan lukien pseudouridiini (ψ), 1-metyylpseudouridiini (m1ψ), tiouridiini (s4U) ja 5-metyylsytoosiini (m5C), lisääminen voi estää TLR7/8:n ja muiden syntymistä koskevien keston reseptoreiden aktivoitumisen, mikä merkittävästi vähentää mRNA:n immunogeneettisuutta.
mRNA-toimitusjärjestelmä
Jotta mRNA säilyttää toiminnassaan, se tarvitsee päästä iskupitoiseen solukappaleeseen ja ilmaista tiettyjä antigeneja. Yksi mRNA-rokotteiden ja terapieiden suurimmista haasteista on saada mRNA toimimaan kohteena oleviin soluihin riittävän korkeilla käännöksitasoilla, mikä edellyttää erittäin tarkkoja ja tehokkaita mRNA-toimitusjärjestelmiä. On kehitetty ja käytetty useita mRNA-toimitusvektoreita, mukaan lukien dendriittiset solut (DCs), protamiini, positiivisesti varustetut polymereet ja positiivisesti varustetut liposomiit.
Kationisen lipidin kompleksit mRNA:ta ja muita valmisteita voidaan yhdistää muodostamaan 80-200 nm -kokoisia nanopartikkeleita, joita kutsutaan lipidinanojoukkoihin (LNPs). Yksi kehittyneimmistä mRNA-toimitusjärjestelmistä, LNP sisältää ionisoituvia kationisia lipidejä, luonnollisia fosfolipidejä, kolesterolia ja polyetyylen glykоля (PEG). Useat RNA-rokotteen ja terapian (siRNA ja mRNA) valmistukset, jotka on hyväksynyt Yhdysvaltain Elintarvikkeiden ja Lääkkeiden hallinto (FDA), perustuvat LNP-toimitusjärjestelmiin.
Yaohai Bio-Pharma Tarjoaa Yhdenmuotoisen Ratkaisun RNA:lle
Mukautettuja toimituksia
|
Arvosana
|
Toimitteet
|
MITTATIETOE
|
SOVELLUKSET
|
|
ei-GMP
|
Lääkeaine, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Esiklinikallinen tutkimus, kuten solun transfektio, Analyysimenetelmien kehitys, Ennakkotyönnäytteen tutkimukset, Kaavauksen kehitys
|
|
Lääkevalmiste, LNP-mRNA
|
|
GMP, Steriilisyys
|
Lääkeaine, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Tutkimusaineiston hyväksyntä (IND), Klinikahaku (CTA), Klinikahakuun liittyvä tarve, Biologian lisenssihakemus (BLA), Kaupallinen tarve
|
|
Lääkevalmiste, LNP-mRNA
|
5000 pulvettia tai esivalmistettuja syrjemiä / kartidgeja
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
