Mukautettu saRNA-synteesi
Itsestään monistava mRNA (saRNA), joka tunnetaan myös nimellä replikoni-RNA, koodaa in vitro -transkription (IVT) mRNA-sekvenssejä ja virusreplikaasigeenejä, jotka ovat peräisin alfaviruksesta tai flaviviruksista. Viruksen replikaasigeenit mahdollistavat mRNA:n itsensä monistumisen, mikä johtaa lisääntyneeseen proteiinien ilmentymiseen ja vaadittavaan vähimmäisannokseen RNA:ta verrattuna monistamattomiin mRNA:ihin. Toinen näkökohta on, että saRNA on suhteellisen suuri molekyyli (yli 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma on kehittänyt joukon mRNA-synteesiteknologioita, jotka tarjoavat ei-amplifioivan mRNA:n ja itsestään monistuvan mRNA:n (1000 nt ~ 14000 nt), kuten sekvenssisuunnittelun ja optimoinnin, IVT:n, puhdistuksen, lyofilisoinnin ja lipidinanohiukkasten (LNP) kapseloinnin. . Kaikki tuotteet julkaistaan tiukkojen laadunvalvontastandardien mukaisesti.
Kuva 1 IVT-mRNA:iden rakenteelliset piirteet: Tavanomainen, sirkulaarinen ja itsestään monistuva mRNA.
Itsevahvistuvan mRNA:n sekvenssiominaisuudet
Itsestään monistuva RNA käsittää neljä ei-rakenneproteiinia (nimetty nsP1:ksi, nsP2:ksi, nsP3:ksi ja nsP4:ksi), jotka ovat peräisin alfaviruksista, Venezuelan hevosen enkefaliittiviruksesta (VEEV). Näistä nsP1:llä on kaksi entsymaattista aktiivisuutta, nimittäin GTaasi ja N7MTaasi, kun taas nsP2:lla on RTPaasiaktiivisuutta, joka on keskeinen IVT-mRNA:n sulkemisessa Cap 0 -rakenteen muodostamiseksi. Lisäksi nsP2 toimii proteaasina ja helikaasina, mikä helpottaa koko nsP-kompleksin monimutkaista prosessointia. NsP3:n tarkka toiminta on edelleen vaikeaselkoinen, mutta se osallistuu vuorovaikutukseen erilaisten isäntäsoluproteiinien kanssa, mikä myötävaikuttaa isännän lisäämän antiviraalisen vasteen heikkenemiseen.
Alfaviruksen subgenominen promoottori (SGP) -alue sijaitsee ennen kiinnostavaa geeniä (GOI). SGP-elementti helpottaa GOI-transkription aloittamista ohittamalla viruksen nsP-proteiineja koodaavan sekvenssin lukemisen.
Kuva 2 Yaohai Bio-Pharma RNASci Platformin eGFP saRNA:n synteesi ja solumääritykset.
Mukautetut saRNA-ratkaisut
SaRNA:n synteesiprotokolla on samanlainen kuin mRNA:n: Mukautettu mRNA-synteesi
- Sekvenssin suunnittelu
- Plasmidimallipohjan valmistus
- in vitro -transkriptio (IVT)
- mRNA:n entsymaattinen rajoitus
- mRNA:n yhteistranskription rajaus
- mRNA:n puhdistus
- mRNA:n lyofilisointi
- LNP-kapselointi
- Analyysi ja testaus
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
