Ympyrämuotoinen mRNA (circRNA) on laajalti käytetty geenien tai proteiinien toimintojen tutkimisessa. Samalla se on suosittua kevyttömien ja hoitovaihtoehtojen kehityksessä, samoin kuin mRNA:ta.
Yaohai Bio-Pharma on kehittänyt joukon circRNA-synteesitekniikoita tarjotaan korkealaatuisia RNA-molekyylejä, kuten sekvenssien suunnittelu ja optimointi, in vitro -transkriptio (IVT), ympyröinti/cyklointi, puhdistus ja lipidinanojäsenten (LNP) inkapselointi. Kaikki tuotteet julkistetaan tiukkojen laadunvalvonnan (QC) standardeja noudattaen.
Vertailevana lineaarisen mRNA:ta, ympyrämuotoinen RNA (circRNA) on rakenteeltaan vakaampi ja se on tärkeä keskusteluaihe nykyisessä nukleevaaraiteiden tutkimuksessa. Sen sovellusalueet ovat laajat eri aloilla, olipa kyseessä koodiva circRNA tai ei-koodiva circRNA, mukaan lukien infektiotauteja vastaavat ehkäisyrokit, hoitoon tarkoitetut syöpärokotteet, terapeuttiset syöpälääkkeet, proteiinien korvaushoito, uudelleenyhdistävä lääketiede, solu- ja geenihoidot (CGT), molekulaarihapa-tekijänä ja RNA aptamerina.
Prosessi | Valinnaiset palvelut | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (päivä) |
circRNA-sekvenssin suunnittelu ja optimointi | Koodaavien sekvenssien suunnittelu ja optimointi | CDS-koodonin optimointi | 1 |
Ei-koodaavien jonojen suunnittelu ja optimointi | Introni ja eksoni sekvenssi, homologinen käde ja väliaineen suunnittelu ja optimointi | 1-2 | |
Kiertyvän plasmidin valmistus | Geeninsynteesi | Geenisynteesi (kolmannen osapuolen kanssa) | 7-10 |
Plasmidin lisääntyminen | Plasmidin lisääntyminen | 2 | |
Plasmidin eristys | |||
Lineaarisen plasmidiin valmistaminen | Plasmidin linearisointi ja puhdistus | Plasmidin linearisointi | 1 |
Linearisoitunut DNA-puhdistus | |||
In vitro -transkriptio ja syklointi | In vitro -transkriptio ja syklointi | In vitro -transkriptio ja syklointireaktiot | 1-2 |
RNase R haaroitus | |||
Optimointi-valinnainen | Reaktiosastot, ajan optimointi | 2-5 | |
circRNA-purifiointi | Perinteinen siivousmenetelmä | Litiumkloriidiputoituminen | 1 |
Magneettisten perhonen käyttöön perustuva puhdistus | 1 | ||
Erittäin puhtaan circRNA-purifiointi | Valmisteverkon Korkean Suorituskyvyn Nesteseparointi (HPLC) | 1-2 | |
Puskentajan vaihto | Ultrasuodatus | 1 | |
circRNA lyofilisointi | Näyte täyttö | Täytys | 2-3 |
Lyofylointi | Esikostominen | ||
Ensimmäinen kuivatus (sublimaatio) | |||
Toinen kuivatus (desorptio) | |||
circRNA-LNP-pakkaus | LNP-inkapselointi | Materiaalin ja vedesteen esikäsittely | 2 |
Mikrofluidiikkalaitteen sekoitus | |||
Puskentajan vaihto | Tangentiaalinen virtausfiltrointi | 1 | |
Sterili | Suodatus | ||
Plasmid-DNA:n laadunvalvonta | Konsentraatio/puhdasuus | Ultraviolettispektrometria (UV) | 1-2 |
Plasmidin konformaatio | Agarosegelelektroforeesi (AGE) | ||
Kapillaarielektroforeesi (CE) - valinnainen | |||
Plasmidi tunnistaminen | Rajoittumisensiimien tunnistaminen/AGE | ||
CircRNA-laadunvalvonta | Konsentraatio/puhdasuus | Ultraviolettispektrometria (UV) | - |
Puhtaus | Agrariogeleelektroforeesi (AGE)/E-gel | 0.5 | |
HPLC-valinnainen | 1 | ||
CircRNA-LNP:n laadunvalvonta | Kapselointitehokkuus | RiboGreen-menetelmä | 1 |
Partikkelikoko | Dynaaminen valosironta (DLS) | 1 | |
Polyydispersiivinen indeksi | Dynaaminen valosironta (DLS) | 1 | |
Zeta-potentiaali | Dynaaminen valosironta (DLS) | 1 | |
Solupohjainen voimakkuustesti | Solun transfektio | Solujen kasvatus, solun transfektio | 4 |
Kohteena olevan proteiinin havaitseminen | Fluoresenssihavainto, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfektoimme lisätyn vihersäteisen fluoresenssiproteiinin ympyröity RNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA ja luciferase circRNA 293T-soluihin ja havaittiin kohteena olevan proteiinin fluoresenssillä, luminesenssillä tai värisignaalilla, western blot -menetelmällä (WB) tai enzyymiyhteydetunnistuskeskeytysanalysyllä (ELISA).
CircRNA-näytteiden solupohjaiset voimakkuustestit Yaohai Bio-Pharma -yhtiöllä