Sirkulaarista mRNA:ta (circRNA) on käytetty laajalti geenien tai proteiinien toimintojen tutkimuksessa. Samaan aikaan se on suosittu profylaktisten ja terapeuttisten biologisten aineiden kehittämisessä, samankaltaisten mRNA:n kanssa.
Yaohai Bio-Pharma on kehittänyt joukon sircRNA-synteesitekniikoita korkealaatuisen RNA:n tuottamiseksi, kuten sekvenssisuunnittelun ja optimoinnin, in vitro -transkription (IVT), kiertokirjeen/syklisoinnin, puhdistuksen ja lipidinanohiukkasten (LNP) kapseloinnin. Kaikki tuotteet julkaistaan tiukkojen laadunvalvontastandardien (QC) mukaisesti.
Lineaariseen mRNA:han verrattuna sirkulaarinen RNA (circRNA) on rakenteeltaan vakaampi ja se on tärkeä hot spot nykyisessä nukleiinihappolääketutkimuksessa. Sillä on laaja valikoima sovelluksia eri aloilla, joko koodaavana circRNA:na tai ei-koodaavana sircRNA:na, mukaan lukien profylaktiset rokotteet infektiosairauksia varten, terapeuttiset onkologiarokotteet, terapeuttiset onkologiset lääkkeet, proteiinikorvaushoito, regeneratiivinen lääketiede, solu- ja geeniterapia (CGT) , molekyylisienen rooli ja RNA-aptameeri.
Käsitellä asiaa | Valinnainen palvelu | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (päivä) |
circRNA-sekvenssin suunnittelu ja optimointi | Koodaussekvenssien suunnittelu ja optimointi | CDS-kodonioptimointi | 1 |
Koodaamattomien sekvenssien suunnittelu ja optimointi | Intron- ja eksonisekvenssi, homologinen käsivarsi ja välikappaleen suunnittelu ja optimointi | 1-2 | |
Pyöreän plasmidin valmistus | Geenisynteesi | Geenisynteesi (kolmannen osapuolen) | 7-10 |
Plasmidin monistus | Plasmidin monistus | 2 | |
Plasmidin uuttaminen | |||
Linearisoidun plasmidin valmistus | Plasmidin linearisointi ja puhdistus | Plasmidin linearisointi | 1 |
Linearisointi DNA:n puhdistus | |||
In vitro -transkriptio ja syklisointi | In vitro -transkriptio ja syklisointi | In vitro -transkriptio- ja syklisointireaktiot | 1-2 |
RNaasi R:n pilkkominen | |||
Optimointi - valinnainen | Reaktion kokoonpano, ajan optimointi | 2-5 | |
sircRNA:n puhdistus | Perinteinen puhdistusmenetelmä | Litiumkloridisaostus | 1 |
Magneettisten helmien puhdistus | 1 | ||
Erittäin puhdas sircRNA-puhdistus | Preparatiivinen korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) | 1-2 | |
Puskurin vaihto | Ultrafiltraatio | 1 | |
sircRNA-lyofilisointi | Näytteen täyttö | Täyte | 2-3 |
lyofilisointi | Esipakastus | ||
Ensisijainen kuivaus (sublimaatio) | |||
Toissijainen kuivaus (desorptio) | |||
circRNA-LNP-kapselointi | LNP-kapselointi | Materiaalien ja nesteen esikäsittely | 2 |
Mikrofluidisten laitteiden sekoitus | |||
Puskurin vaihto | Tangentiaalinen virtaussuodatus | 1 | |
steriloitu | Suodatus | ||
Plasmidi-DNA:n laadunvalvonta | Pitoisuus/puhtaus | Ultravioletti (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Plasmidin konformaatio | Agaroosigeelielektroforeesi (AGE) | ||
Kapillaarielektroforeesi (CE) - Valinnainen | |||
Tunnista plasmidi | Restriction Enzyme Identification/AGE | ||
CircRNA:n laadunvalvonta | Pitoisuus/puhtaus | Ultravioletti (UV) spektrofotometria | - |
Puhtaus | Agaroosigeelielektroforeesi (AGE)/E-geeli | 0.5 | |
HPLC-valinnainen | 1 | ||
CircRNA-LNP:n laadunvalvonta | Kapseloinnin tehokkuus | RiboGreen menetelmä | 1 |
Hiukkaskoko | Dynaaminen valonsironta (DLS) | 1 | |
Polydispersiteettiindeksi | Dynaaminen valonsironta (DLS) | 1 | |
Zeta-potentiaali | Dynaaminen valonsironta (DLS) | 1 | |
Solupohjainen tehomääritys | Solujen transfektio | Solujen pinnoitus, solujen transfektio | 4 |
Kohdeproteiinin havaitseminen | Fluoresenssihavainto, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfektoimme tehostetun vihreän fluoresoivan proteiinin sircRNA:n (eGFP circRNA), mCherryn circRNA:n, lusiferaasicircRNA:n 293T-soluihin ja havaitsimme kohdeproteiinin fluoresenssi-, luminesenssi- tai värisignaalilla, Western blotilla (WB), entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA).
Yaohai Bio-Pharman circRNA-näytteiden solupohjaiset tehomääritykset