Yaohai Bio-Pharma valmistaa sircRNA:ta, joka perustuu PIE-järjestelmään (eksonien ja intronien kohdistus), joka perustuu tyypin I intronien itsesilmukointitoimintoon RNA:n syklisoinnin saavuttamiseksi. PIE-rakenne on suunniteltu käyttämällä T4 td -geeniä tai fishy tRNA -prekursorigeeniä, ja järjestely on seuraava:
RNA:n intronin ja sitä tukevan eksonin fragmentti on jaettu kahteen osaan (5'-pääte ja 3'-pääte), joissa 5'-pään sekvenssi siirretään kohdesekvenssin häntään, 3'-pään sekvenssi insertoidaan sekvenssin etuosaan. kohdesekvenssi ja kohdegeenisekvenssi insertoidaan keskelle.

GTP:n katalyysin alaisena PIE-rakenne johtaa muiden sekvenssien kuin intronien syklisoitumiseen. Yhdistettynä kohtuulliseen syklisointinopeuden tehostamisstrategiaan Yaohai Bio-Pharma voi saavuttaa jopa 4 kb:n sekvenssien syklisoinnin yli 80 %:n syklisaationopeudella.

Kuva 1. PIE-järjestelmään perustuva sircRNA:n in vitro -kierto
Palvelujen tiedot
Käsitellä asiaa |
Valinnainen palvelu |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (työpäivä) |
circRNA-sekvenssin suunnittelu ja optimointi |
Koodaussekvenssien suunnittelu ja optimointi |
CDS-sekvenssin kohdistus
CDS-kodonin optimointi
|
1 |
Ei-koodaavien sekvenssien suunnittelu ja optimointi |
Introni- ja eksonisekvenssien suunnittelu ja optimointi
Homologisen varren sekvenssin suunnittelu ja optimointi
Välikappalesarjan suunnittelu ja optimointi
|
1-2 |
Yhteiset strategiat mRNA-sekvenssisuunnittelulle
CircRNA-komponentit |
Biologiset toiminnot |
Optimointistrategiat |
Kaksiterminaaliset introni- ja eksonisekvenssit |
GTP-katalysoima intronin itsesilmukointi intronin ulkopuolella olevien sekvenssien syklisointiin. |
Suunniteltu T4 td -geenin tai kalaöljyn tRNA-prekursorigeenin mukaan. |
Koodaus |
IRES |
Sisäinen ribosomin tunnistuskohta, joka säätelee sircRNA:n translaatiota. |
Eri viruslähteistä, esim. EMCV-, CVB3-lähteistä, peräisin olevien sisäisten ribosomien sisääntulokohtien (IRES) sekvenssien seulonta. |
CDS |
Proteiinia koodaavat alueet, sekvenssit, jotka koodaavat antigeenejä, vasta-aineita tai muita toiminnallisia proteiineja. |
Kodonin optimointi lisää translaation tasoa; tietyillä ei-optimaalisilla kodoneilla voi olla rooli proteiinin laskostumisessa. |
Koodaamaton |
Ei-koodaavat sekvenssit |
Kohdista miRNA:t tai proteiinit geenin tai proteiinin säätelyyn. |
MiRNA:iden tai proteiinien spesifisten sitoutumiskohtien kohdistaminen voi toistaa sitoutumiskohdan sekvenssit. |
Ominaisuuksemme
- Optimoitu PIE-syklisointijärjestelmä Yhdistelmä kohtuullisilla optimointistrategioilla yli 80 %:n syklisointiasteen saavuttamiseksi;
- Huippuluokan CDS-optimointitiimi Yhteistyö ammattimaisen AI-algoritmiryhmän kanssa CDS-alueen kodonien optimoinnin loppuunsaattamiseksi;
- Mature and Perfect Process circRNA voidaan saavuttaa korkealla syklisointitehokkuudella, korkealla stabiilisuudella ja korkealla translaatiotehokkuudella.
Tapaustutkimus
Yaohai Bio-Pharma toi markkinoille kontrollituotteen, tehostetun vihreän fluoresoivan proteiinin (eGFP) sircRNA:n, joka perustuu PIE-järjestelmään RNA:n syklisoinnin saavuttamiseksi.
Perinteisellä transfektioreagenssilla eGFP sircRNA transfektoidaan 293T-soluihin ja eGFP (vihreä) fluoresoiva signaali voidaan havaita 24 tunnin kuluttua, mikä vahvistuu 48 tunnin kuluttua. Fluoresoiva signaali voidaan havaita vielä 7. päivänä ja 14. päivänä sen jälkeen. transfektio.

eGFP-circRNA:n in vitro -ekspression validointi