CircRNA:n valmistuksessa tarvitaan lineaarista RNA:a syötteeksi (RNA-esikunta) syklisointiin, jossa RNA-esikunta valmistetaan yleensä lineaarisella plasmidi-DNAn avulla transkriptio-mallina ja se transkriboidaan in vitro T7 RNA-polymeraasin avulla.
Korkealaatuinen plasmidi-DNA on välttämätön in vitro -transkriptiolle (IVT). Kypsyneen plasmidien valmistussa palvelualustan pohjalta Yaohai Bio-Pharma voi tarjota korkean puhtauden ja standardin lineaarisen plasmidi-DNA (pDNA) valmistuspalvelun IVT-tuotteiden kokonaisuuden varmistamiseksi.
Prosessi | Valinnaiset palvelut | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (työpäivä) |
Kiertyvän plasmidin valmistus | Geeninsynteesi | Geenisynteesi (kolmannen osapuolen kanssa) | 7-10 |
Plasmidin lisääntyminen | Plasmidin lisääntyminen | 2 | |
Plasmidin eristys | |||
Lineaarisen plasmidiin valmistaminen | Plasmidin linearisointi ja puhdistus | Plasmidin linearisointi | 1 |
Linearisoitunut DNA-puhdistus | |||
Plasmidin DNA-laadun valvonta | Konsentraatio ja puhtaus | Ultraviolettispektrometria (UV) | 1-2 |
Plasmidin konformaatio | Agarosegelelektroforeesi (AGE) | ||
Kapillaarielektroforeesi (CE) - valinnainen | |||
Plasmidi tunnistaminen | Rajoitusensiimi-tunnistus/AGE |
Joustava linearisointimenetelmien valinta
DNA-eristämisen ja puhdistamismenetelmien optimointi korkeiden tuottavuuden saavuttamiseksi.
Tiukat prosessin hallintakriteerit, tutkimustarkoituksiin tarkoitettujen plasmidien superhelikaalinen muoto on yli 80%.
Korkean standardin ja tehokkaiden plasmidien valmistus- ja laadunvalvontapalveluita kokeiluntarpeiden täyttämiseksi.
Ottaen esimerkiksi Yaohai Bio-Pharm:n tuotteen mCherry circRNA:n, transkriptiomalliplasmidien (tutkimustaso) superkierron suhde on yli 70 %, ja linearisaatioprosentti on lähes 100 %.
mCherry circRNA valmistetaan linearisoituneesta plasmidista mallina ja siirretään 293T-soluihin. Korkea fluoresenssien ilmaisu (punainen fluoresenssi) havaitaan 24 tunnin kuluttua siirtoon, mikä vahvistuu 48 tunnin kuluttua, ja sitä voidaan edelleen havaita seitsemännessä ja neljäteentoista päivänä siirron jälkeen.
mCherry-geeni ilmastosyy tuotetaan vakiona ja tehokkaasti, ja skriptauksen mallin puhtaus täyttää vaatimukset korkealaatuisen circRNA-lääkkeen tuotteen (DP) suhteen.
In vitro ilmausvalidointi mCherry circRNA:sta