RNA-esiketojen erävalmistuksessa yleisesti käytetty menetelmä on in vitro -transkriptio (IVT). IVT-reaktiossa käytetään linearisoitua plasmidi-DNA:ta, joka sisältää T7-promoterin mallina, ja se syntyyssii RNA-esiketon nukleosiditrifosfaattien (NTP) olemassaoloessa T7 RNA-polymeraasin kanssa.
In vitro -syklistysmenetelmiin kuuluvat kemiallinen liitos, enzyymiliaso ja permutoitu intron-exon (PIE) -menetelmä. Kemiallinen liitos ja enzyymiliaso sopivat paremmin lyhyempien RNA:molekyylien syklistykseen. Kun fragmentti on suurempi kuin 100 nt, syklistyshopeayhteen menee merkittävästi vähemmän. Vastaavasti PIE-järjestelmää perustuva nuklease-menetelmä voi saavuttaa 8 kb sekvenssin syklistyksen.
Guanosiinitrifosfaatin (GTP) katalyysissa PIE-rakenne kärsii ekstrainsuonien syklointia. Kombinoituna tehokkaalla strategialla nopeuttaakseen syklointinopeutta, Yaohai Bio-Pharma voi saavuttaa jopa 4 kb pituisen jonon sykloinnin, jonka syklointitehokkuus on yli 80 %.
RNA:n in vitro syklointireaktio kulkee seuraavasti:
RNA-alkuperäinen syntetoidaan in vitro -transkriptiolla, ja PIE-komponentti suorittaa itseispuistuksen GTP:n katalyysissa muodostaakseen circRNA:n.
Palveluiden yksityiskohdat
| Prosessi |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (työpäivä) |
| In vitro -transkriptio ja sykli |
Reaktiosuunnitelman vahvistaminen |
1-2 |
| In vitro -transkriptio ja syklointireaktiot |
| RNase R haaroitus |
| Reaktioiden optimointi |
Reaktiosastot, ajan optimointi |
2-5 |
Ominaisuutemme
- Tiukka testisuunnittelu ja -optimointi
RNA-syklinen yli 4 kb voidaan saavuttaa.
- Korkea syklimisvaikutusaste
Syklimisnopeus yli 80 % voidaan saavuttaa järkevän sekvenssioptimointistrategian avulla.
Tiukasti valvomalla RNaseja kokeellisessa ympäristössä ja kulutuksissa RNA:n hajoaminen estetään tehokkaasti.
Tapaustutkimus
CircRNA:n in vitro sykliminen ja rikastus
PIE-järjestelmän perusteella Yaohai Bio-Pharma on optimoinut circRNA:n sekvenssin, jossa syklimisaste yli 80 % voidaan saavuttaa agarosegelelektrfoorin (AGE) avulla. Käyttämällä RNase R:ää circRNA rikastetaan, ja E-gelelektrfoorin tuloksista nähdään, että lineaarinen RNA-alkuperäinen materiaali hajotetaan, ja lisäpuistolla suurin osa katkaisemattomasta circRNA:sta voidaan poistaa. Puistosvässi kehitettiin itse Yaohai Bio-Pharmalla.
CircRNA:n in vitro sykliminen ja rikastus
FI
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
