Solupohjaiset tehokkuustestejä
MRNA-voimakkuustestin merkitys
MRNA-rokotteiden ja hoitoaineiden nopeasti kehittyvän kentän myötä tarvitaan tiettyjä analyysimenetelmiä voimakkuuden (biologisen aktiivisuuden määrittämiseksi) testaamiseen, jotka koskevat mRNA:n käännösefektiivisyyttä. Nämä menetelmät perustuvat yleensä solutransfektioksiin ja kohdeproteiinin funktionaalisiin testeihin.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa solupohjaisia voimakkuustestejä mRNA-lääkeyhdisteille tai LNP-tuotteille, mukaan lukien solutransfektiot (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 solut jne.) sekä ELISA- tai Western Blotting (WB)-testit.
Säädösten vaatimukset voimakkuustesteille
WHO:n sääntelyhuomioissa sanotaan: “Jokaisen lohkon lopullisen rokotteen voimakkuuden tulisi määritellä sopivalla ja validoidulla toiminnallisella menetelmällä. Mahdollisia in vitro -voimakkuustestejä voivat sisältää solupohjaiset transfektiomenetelmät tai soluttomat testit.” USP suosittelee “solupohjaista analyysia” mRNA:n voimakkuuden testaamiseksi, eli kohdeproteiinin ilmaisua.
Analyyttinen menetelmä
Analyysi
|
Menetelmät
|
Voimakkuustestit
|
Solupohjainen transfektio ja kohdeproteiinin tunnistus:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 solut jne.
|
Toimenpide
Vaihe 1. Solupohjainen transfektio mRNA:lla tai mRNA-LNP:llä
Solut kasvatetaan ja transfektoidaan mRNA:lla tai mRNA-LNP:llä. Tarkemmin sanottuna, mRNA sekoitetaan transfektioaineeseen ennen siirtämistä, kun taas mRNA-LNP transfektoidaan suoraan soluihin. 24-48 tunnin kuluttua keskittele ilmaantunut proteiini supernaatantti centrifugoinnilla.
Vaihe 2. Kohdeproteiinin toiminnalliset testit
Suorita ELISA- tai WB-koekulut arvioimaan kohdeproteiinien funktionaalista sidontaa.
Tapaustutkimus
Solupohjaiset tehokkuuskokeet mRNA-näytteille
Yaohai-BioPharma on kehittänyt solupohjaisen tehokkuuskokeen menetelmän mRNA:lle, joka sisältää solukasvatussa, solun transfeksion ja proteiinin funktionaaliset koekulut. Transfeksoidimme eGFP-mRNA:ta, mCherry-mRNA:ta, luciferase-mRNA:ta ja spike-proteiini-mRNA:ta 293T-soluihin ja havaittiin kohdeproteiini fluoresenssinsäteilyn, luminesenssin tai värisignaalin sekä WB:n ja ELISA:n avulla.

Solupohjaiset tehokkuuskokeet mRNA-tuotteille Yaohai Bio-Pharmalta