Væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS)-baserede peptidkortlægningsdata vil give en stor mængde information om den primære og højere ordens struktur af native og rekombinante proteiner, herunder aminosyresekvensdækning, post-translationelle modifikationer (PTM'er, f.eks. glycosylering) oxidation, deamidering), disulfidbindinger osv.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder peptidkortlægningsanalysetjenester for dit målprotein af LC-MS for at fremskynde din forskning i proteinstruktur.
Vi har været involveret i proteinstrukturkarakterisering af forskellige store molekyler, herunder rekombinante underenhedsvacciner, nanostoffer/VHH'er/ enkeltdomæne antistoffer (sdAbs), antistoffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vækstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav til peptidkortlægning
ICHQ6B guideline anbefaler, "Selektiv fragmentering af produktet til diskrete peptider udføres ved hjælp af egnede enzymer eller kemikalier, og de resulterende peptidfragmenter analyseres ved HPLC eller anden passende analytisk procedure. Peptidfragmenter skal så vidt muligt identificeres ved hjælp af teknikker som aminosyresammensætningsanalyse, N-terminal sekventering eller massespektrometri (MS). Peptidkortlægning af det aktive stof eller lægemiddelproduktet (DP) ved hjælp af en passende valideret metode er en metode, der ofte bruges til at bekræfte den ønskede produktstruktur til batchfrigivelse."
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Peptid kortlægning |
Proteasefordøjelse og væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) |
Analytisk procedure
1. Reduktion og Alkylering
Formålet er at reducere disulfidbroer og blokere den dannede frie thiol. Reduktion af disulfidbroer hjælper med at åbne proteinstrukturen, hvilket gør den proteolytiske fordøjelse mere effektiv. Dette trin vil også bryde broerne mellem kæderne i tilfælde af flerkædede proteiner, som har disulfidbroer, der forbinder kæderne (f.eks. monoklonale antistoffer, mAbs).
2. Fordøjelse af proteinet ved hjælp af enzymer
Formålet er at nedbryde proteinet til peptider. Vi valgte enzymerne ud fra proteinets teoretiske sekvens og viden om teoretisk fordøjelse af proteinet ved hjælp af enzymer. Hvis du vælger enzymer på denne måde, skulle der resultere i den bedste peptidkortlægningsanalyse.
3. Analyse af de fordøjede peptider Brug af online omvendt fase-højtydende væskekromatografi med ultraviolet (UV) og elektrospray-massespektrometrisk detektion (LC/ES-MS).
Peptidseparation baseret på polaritet ved hjælp af LC (omvendt fase-LC)
Efterhånden som peptidet eluerer fra LC-søjlen, vil massespektrometeret generere masseinformation sammen med fragmentioninformation, som giver os mulighed for at bestemme sekvensinformationen. Vi bruger sekvensinformationen til at bekræfte peptididentitet og give primær information.
Vi kan også generere fragmenteringsinformationen fra peptiderne, når de kommer ind i massespektrometerkilden fra LC-kolonnen. Afhængig af kravene til undersøgelsen er dette enten selektiv LC-MS/MS eller ikke-selektiv, hvilket kan betragtes som en form for tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
