Besættelse af N-glycosyleringssted er et fysiologisk træk ved glycoproteiner og producerer hovedsageligt N-glycan. Yaohai Bio-Pharmas N-glykosyleringssteds belægningsanalyseservice udføres gennem fordøjelse, frigivelse, berigelse og analyse ved hjælp af væskekromatografi-elektrosprayioniseringsmassespektrometri-massespektrometri (LC-ESI-MS/MS).
Vi har været involveret i proteinstrukturkarakterisering af forskellige store molekyler, herunder rekombinante underenhedsvacciner, nanostoffer/VHH'er/ enkeltdomæne antistoffer (sdAbs), antistoffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vækstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav til belægning af N-glykosyleringssted
Ifølge ICH Q6B guideline, "for glycoproteiner bestemmes kulhydratindholdet (neutrale sukkerarter, aminosukkere og sialinsyrer). Desuden analyseres strukturen af kulhydratkæderne, oligosaccharidmønsteret (antennær profil) og polypeptidkædens glycosyleringssted(er) i bedst muligt omfang."
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| Besættelse af N-glykosyleringssted |
LC-MS efter deglycosylase og proteasefordøjelse |
Procedurer
1. Proteinfordøjelse af proteiner for at generere små peptidfragmenter.
2. N-glycan-frigivelse ved hjælp af endoglycosidase H eller PNGase F. Endoglycosidase H spalter bindingen mellem de to GlcNAc-rester i kernen af N-bundne glycaner, mens PNGase F er en glycoamidase, der skiller bindingen mellem GlcNAc og Asn, frigør hele sukkerkæde og konvertere Asn til Asp med masseforøgelse på 1-Da.
3. N-glycopeptidberigelse via HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Analyse af N-bundet glycosyleringssted besættelse ved anvendelse af LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
