Rekombinante proteiner ser ofte oxidation af eksponerede aminosyresidekæder, såsom tryptofan (Trp) og methionin (Met), hvilket ændrer proteiners fysisk-kemiske egenskaber. Disse ændringer kan igen bidrage til at ændre de berørte proteiners biologiske funktioner, såsom tab af binding, reduktion af enzymatisk aktivitet, uventet hurtig clearance. Proteiner er vigtige mål for oxidative reaktioner, fordi de reagerer hurtigt med oxidanter og er rigelige i celler, ekstracellulære væv og kropsvæsker.
Derfor er overvågning af proteinoxidation afgørende for vellykket biofarmaceutisk udvikling.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder aminosyreoxidationsanalyseservice, som giver dig mulighed for at bestemme aminosyreoxidationen ved væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS).
Vi har været involveret i proteinstrukturkarakteriseringen af forskellige store molekyler, herunder rekombinante underenhedsvacciner, nanostoffer/VHHs/enkeltdomæne-antistoffer (sdAbs), antistoffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vækstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav til aminosyreoxidation
I henhold til ICH Q6B-retningslinjerne kan oxiderede former påvises og karakteriseres ved kromatografiske, elektroforetiske og/eller andre relevante analytiske metoder (f.eks. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapillærelektroforese, massespektroskopi, cirkulær dikroisme).
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Aminosyreoxidation |
LC-MS, omvendt fase højtydende væskekromatografi (RP-HPLC) eller hydrofob interaktionskromatografi højtydende væskekromatografi (HIC-HPLC) og massespektrometri |
Analytiske procedurer
1. Prøveforberedelse
2. LC-MS
3. Dataanalyse
Tryptofan (Trp)-rester er særligt tilbøjelige til oxidation på grund af den høje reaktivitet af den aromatiske indol med reaktive oxygenarter. Trp-oxidation kræver en vis eksponering af Trp-rester, der normalt er begravet i proteinets tredimensionelle struktur.
Men når Trp-rester oxideres, kan de omdannes til en række produkter med meget forskellige egenskaber fra den oprindelige Trp. Den mest almindelige vej for Trp-oxidation omfatter dannelsen af N-formylkinurenin (masseforskel: +32).
En anden almindeligt oxideret aminosyre er methionin. Svovlatomet i Met-resten kan acceptere enten et eller to oxygenatomer, hvilket fører til dannelsen af sulfoxid (masseforskel: +16) eller sulfon (masseforskel: +32), tilsvarende. Denne modifikation er relativt almindelig på grund af den typisk høje overfladeeksponering af Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
