N-glykan profiling er afgørende for produktionen af biopharmaceutiske produkter. Yaohai Bio-Pharma tilbyder N-glykan profiling service ved hjælp af Væskeskromatografi-MasseSpektrometri (LC-MS) af frigjorte og markerede glykaner. De generelle trin for at forberede N-glykan prøve inkluderer spaltning af glykoprotein (GP), de-glykosylering, rense, markering/derivatisering, og Solid Fase Ekstraktion (SPE).
Vi har været inddraget i karakteriseringen af proteinstrukturen for forskellige store molekyler, herunder Rekombinante Subenhedsvaciner, Nanokroppe/VHH'er/Enkelt-domæne-antistoffer (sdAbs), Antibiotikfragmenter, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Vækstfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener osv.
Reguleringskrav for N-Glykan Profiling
I overensstemmelse med ICH Q6B-vejledning, "for glykoproteiner bestemmes karbohydratholdet (nøgletal, aminosugarer og sialinsyurer). Desuden analyseres strukturen af karbohydratkæderne, oligosaccharidmønstret (antenneprofilen) og glykosylationsstedet(i) på polypeptidkæden i den udstrækning det er muligt.
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| N-glykan Profiling |
Væskediffusion-masseanalyse (LC-MS) af frigivne og markerede glykaner |
Procedurer
1. Enzymatisk glykanfrigivelse med Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatisering af frigivne glykaner ved 2-aminobenzamid (2-AB)
3. Renuration af de høstede N-glykaner på en TSK Amide - 80 kolonne, hvis der er store mængder af tensider, ikke-volatile salter eller stoffer med frie aminogrupper til stede
4. Markeringsfremgangsmåde ved fluorescerende 2-aminobenzamid (2-AB)
5. LC-MS-analyse af markerede N-glykaner
6. Dataanalyse
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
