Betydningen af Downstream Process (DSP) udvikling
Den fulde fermentationsbrødre indeholder målprotein eller plasmid, samt produkt- og procesrelaterede forurenninger, f.eks. aggregeringer, mikrobielle cellesubstrater, Host Cell Proteins (HCP), Host Cell DNA (HCD), endotoxin og antibiotika.
Derfor er det afgørende at designe en effektiv DSP, rensningsproces, for at fjerne bestemte forurenninger og producere højgradigt renset og høj kvalitet på råvaren. Desuden kan optimeringen af rensningsprocessen hjælpe med at øge produktgenopstod, reducere omkostningerne og forbedre processens skalerbarhed og gentagelighed.
Nøgleord: procesudvikling, optimering og validering, rensningsproces, chromatografi, forurenningselimination, HCP fjernelse, HCD eliminering, endotoxin fjernelse, proteindenaturering og refolding, VLP sammensætning, konjugation
Anvendelse: Biopharmaceutisk industri, menneskelig medicin, dyremedicin, vacciner, rekombinante store molekylære biologiske stoffer, rekombinante biologiske stoffer, biologisk reagens
DSP-løsninger fra Yaohai Bio-Pharma
Vi har omfattende erfaring med at isolere målproteiner eller plasmider fra komplekse matricer ved at udvikle og optimere nedstrømsrensningsprocessen. Der findes forskellige typer enhedsoperationer, der er egnet til rensningsprocessen af biologiske stoffer, herunder centrifugering, filtrering, homogenisering, alkalisk lysning, ultrafiltrering,沉淀, protein denaturering og refolding, kromatografi mv.
Vores tilgængelige rensningsudviklingservices inkluderer:
- Udvikling af hele rensningsprocessen fra celle- eller supernatantindsamling til det endelige aktive ingrediens.
- Optimering af rensningsprocessen baseret på produkt- og procesrelaterede forurenstillinger for at forbedre produktkvalitet og -sikkerhed, f.eks. HCP, HCD, endotoxin.
- Definition og optimering af nøgletal i en eller flere enhedsoperationer, herunder cellelyse, tangentialstrømsfiltrering, resinscreening, chromatografi, proteindenaturering og refolding, mv.
- Optimering af processet i forhold til kvalitet, udbytte, genopreting, omkostninger og skalerbarhed.
- Validering af nedstrømsrensningsprocessen.
- Risikobaseret vurdering af parameteromfang og Design of Experiments (DoE) i procesmodellering.
Servicedetaljer
Standardiserede protein- eller plasmidrensningsplatforme bygger på flere grove rensningssteg og mindre end 4 chromatografisteg, herunder indfangning, mellemrengøring og polering.
| Servicedetaljer |
Enhedsoperationer |
Parametre |
| Grovrengøring |
Centrifugeringsprocessen |
Rotationshastighed, Tid |
| Højtryks-homogenisering |
Total fast indhold, Tryk, Cyklusser |
| Kontinuert alkalisk lysning |
Forholdet mellem opsvævne celler og lysningsløsning, Lysningstid |
| Tangentiel strømfiltration |
Membranmateriale og porstørrelse, Fodstrømsrate Transmembrantryk (TMP), Forholdet mellem filtratvolumen og membranareal |
| Nedbrydning |
Type og koncentration af nedbrydningsmiddel, Tilføjelsesstof, pH, Temperatur, Tid |
| Denaturering og refolding |
Inklusionskropspartikel solubilisering |
Denaturationskoncentration (f.eks., Ure, Guanidin HCl, Kraftigt jonisk sæbe), Sæber (f.eks., Sodium dodecylsulfat, SDS), Reducerende midler (f.eks., Dithiothreitol, DTT), Kompleksbindende midler (Ethylenediaminetetraacetatsyre, EDTA), Temperatur, Tid |
| Proteinrefolding |
Refoldingmetoder (dilution, dialyse eller SEC-refolding), Proteinkoncentrationer, Buffer, pH, Temperatur, Tid, Oksiderende og Reducerende Stoffer (f.eks., Glutathion, GSH/Oxiderede Glutathion, GSSH, DTT/GSSH, Cystein/Cystin), Små Molekyltilsætningsstoffer (L-arginin, Urea, Guanidin/HCl, og Afvaskningsmidler) |
| Fangst, Mellemrening, og Polering |
AC (Affinitetskromatografi) |
Flere typer kromatografiresinstoffer/søjle (f.eks., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Søjlelængde og -diameter, Bufferindhold, Injektionsvolume, Mobil Faseindhold (Adsorption og Desorption), pH, Flow Rate, Binding, Vaskning, og Elutionsbetingelser. |
| IEX (Anion eller Kation Exchange Kromatografi) |
| HIC (Hydrofob Interaktion Kromatografi) |
| Desalting og/eller størrelseseksklusionskromatografi (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Kromatografi) |
| MMC, Blandet Modes Kromatografi |
Case studie
Sag 1
Vi er blevet opdragt til at udvikle og optimere den nedstrøms rensningsproces for at øge proteinrenhed fra 85% til 90%, samtidig med at vi reducerer antallet af chromatografi-trin.
Yaohai leverede en robust og skalérbar rensningsproces med tre chromatografi-trin for det målprotein, et bakterielt allergien. Den endelige renhed nåede 95%.
Sag 2
Yaohai blev udnævnt af vores kunde til at optimere processen for fjernelse af endotoxiner af virus-lignende partikel (VLP) vaccine.
Vores team foretog optimering af chromatografi-parametre og præparerede en lægemidlstof med en renhed på 98% og endotoxin-residuum på 12,8EU/mg.
Vore erfaringer
- Vi har været involveret i udviklingen og produktionen af forskellige store molekyler, herunder rekombinante subenhed-vacciner, VLP'er, hormoner (insulin, GLP-1, væksthormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), vækstfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanobodies/enkeltdomæneantistoffer (sdAbs), enzymmer osv.
Udstyr
Vi anvender brancheledende AKTA Pure, AKTA Avant og preparative HPLC-systemer til udførelse af forskellige kromatografi-metoder, herunder affinitet, ion-udskiftning, hydrofob interaktion, omvendt fase og størrelsesudskillelseskromatografi.
DA
EN
AR
HR
CS
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
