Genetisk modificerede proteiner ser ofte oxidation af udsatte aminosyre-sidekæder, såsom tryptofan (Trp) og metionin (Met), hvilket ændrer de fysikokemiske egenskaber af proteinene. Disse ændringer kan i sin tur bidrage til at ændre de biologiske funktioner hos de påvirkede proteiner, såsom tab af binding, reduktion af enzymaktivitet, uventet hurtig rydning. Protein er vigtige mål for oxidationsreaktioner, da de reagerer hurtigt med oxidanter og er ubesluttet i celler, ekstra-cellulære væv og kropsvæsker.
Derfor er overvågning af protein-oxidation afgørende for vellykket udvikling af biopharmaceutiske produkter.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder analyse af aminosyre-oxidation, hvilket giver dig mulighed for at bestemme aminosyre-oxidationen ved Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS).
Vi har været involveret i Proteinstrukturkarakteriseringen af forskellige store molekyler, herunder Recombinant Subunit Vacciner, Nanobodies/VHHs/Single-domain antibodies (sdAbs), Antibody Fragmenter, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Vækstfaktorer (GF), Enzymer, Collagens etc.
Reguleringskrav for Aminosyreoxidation
I overensstemmelse med ICH Q6B-vejledningen kan oxiderede former opdagtes og karakteriseres ved chromatografiske, elektroforetiske og/eller andre relevante analytiske metoder (f.eks. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapillær elektroforese, massespektroskopi, cirkulær dichroism).
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Aminosyre Oxidation |
LC-MS, Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) eller Hydrophobic Interaction Chromatography High Performance Liquid Chromatography (HIC-HPLC) og massespektrometri |
Analytiske Procedurer
1. Prøveforberedelse
2. LC-MS
3. Datanalyse
Tryptophan (Trp)-resten er særlig underlagt oxidation på grund af den høje reaktivitet af det aromatiske indol med reaktive oxygenspecies. Trp-oxidation kræver nogen eksposition af Trp-reste, der normalt er indkapslet i proteinets tredimensionelle struktur.
Imidlertid, når Trp-resten bliver oxidateret, kan den omdannes til en række produkter med meget forskellige egenskaber fra det oprindelige Trp. Den mest almindelige vei for Trp-oxidation omfatter dannelse af N-formylkinurenin (Massedifferens: +32).
En anden hyppigt oxiderede aminosyre er methionin. Sulfuratommet i Met-residuet kan acceptere enten ét eller to oxygenatomer, hvilket fører til dannelse af sulfoxid (Massedifferens: +16) eller sulfon (Massedifferens: +32), tilsvarende. Denne modificering er relativt almindelig på grund af Methionins typisk høje overfladeeksposition.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
