נתוני מיפוי פפטידים מבוססי כרומטוגרפיה-מסה (LC-MS) יספקו כמות גדולה של מידע על המבנה הראשוני והגבוה יותר של חלבונים מקומיים ורקומביננטיים, כולל כיסוי רצף חומצות אמינו, שינויים לאחר תרגום (PTMs, למשל, גליקוזילציה , חמצון, דאמידציה), קשרי דיסולפיד וכו'.
Yaohai Bio-Pharma מציעה שירותי ניתוח מיפוי פפטידים עבור חלבון היעד שלך על ידי LC-MS, כדי להאיץ את המחקר שלך על מבנה החלבון.
היינו מעורבים באפיון מבני החלבון של מולקולות גדולות שונות, כולל חיסונים רקומביננטיים של תת-יחידות, ננוגודים/VHHs/נוגדנים דומיינים בודדים (sdAbs), שברי נוגדנים, הורמונים/פפטידים, ציטוקינים, גורמי גדילה (GF), אנזימים, קולגנים, וכו '
דרישות רגולטוריות למיפוי פפטידים
הנחיית ICHQ6B ממליצה, "פיצול סלקטיבי של המוצר לפפטידים נפרדים מתבצע באמצעות אנזימים או כימיקלים מתאימים ושברי הפפטידים המתקבלים מנותחים על ידי HPLC או הליך אנליטי מתאים אחר. יש לזהות שברי פפטיד ככל שניתן באמצעות טכניקות כגון ניתוח הרכב חומצות אמינו, רצף N-טרמינלי או ספקטרומטריית מסה (MS). מיפוי פפטידים של החומר הפעיל או המוצר התרופתי (DP) באמצעות שיטה מאומתת כהלכה היא שיטה המשמשת לעתים קרובות כדי לאשר את מבנה המוצר הרצוי לשחרור אצווה".
שיטות אנליטיות
| אָנָלִיזָה |
שיטות |
| מיפוי פפטידים |
עיכול פרוטאז וכרומטוגרפיית נוזלים-ספקטרומטריית מסה (LC-MS) |
נוהל אנליטי
1. הפחתה ואלקילציה
המטרה היא להפחית גשרים דיסולפידים ולחסום את התיול החופשי שנוצר. הפחתת גשרים דיסולפידים עוזרת לפתוח את מבנה החלבון מה שהופך את העיכול הפרוטאוליטי ליעיל יותר. שלב זה ישבור את הגשרים בין השרשראות גם במקרה של חלבונים מרובי שרשרת שיש להם גשרים דיסולפידים המקשרים בין השרשראות (למשל נוגדנים חד שבטיים, mAbs).
2. עיכול החלבון באמצעות אנזימים
המטרה היא לפרק את החלבון לפפטידים. בחרנו את האנזימים על בסיס הרצף התיאורטי של החלבון והידע של עיכול תיאורטי של החלבון על ידי אנזימים. בחירת אנזימים בדרך זו, אמורה להביא לניתוח מיפוי הפפטידים הטוב ביותר.
3. ניתוח הפפטידים המעוכלים שימוש מקוון בכרומטוגרפיית נוזלים עם ביצועים גבוהים לשלב הפוכה עם זיהוי אולטרה סגול (UV) ואלקטרוספריי-מסה זיהוי (LC/ES-MS).
הפרדת פפטידים מבוססת על קוטביות באמצעות LC (הפוך פאזה-LC)
כאשר הפפטיד יוצא מעמודת ה-LC, ספקטרומטר המסה יפיק מידע מסה יחד עם מידע על יונים מקטעים, המאפשרים לנו לקבוע את מידע הרצף. אנו משתמשים במידע על הרצף כדי לאשר את זהות הפפטידים ולספק מידע ראשוני.
אנו יכולים גם ליצור את מידע הפרגמנטציה מהפפטידים כשהם נכנסים למקור ספקטרומטר המסה מעמודת LC. בהתאם לדרישות המחקר, זהו LC-MS/MS סלקטיבי או לא סלקטיבי, אשר יכול להיחשב כצורה של טרשת נפוצה טנדם.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
לא
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
