נתוני מיפוי פפטידי מבוססי כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה (LC-MS) יספקו כמות גדולה של מידע על המבנה הראשוני והסידורי הגבוה יותר של חלבונים טבעיים ורקורסנטיים, כולל תכיסת חומצות אמינו, שינויים פוסט-טרנסלאציוניים (PTMs, למשל, גליקוזילציה, חמצון, דיאמידציה), קשרי דיסולפיד, וכו'.
Yaohai Bio-Pharma מציעה שירותי ניתוח מיפוי פפטידי עבור החלבון המטרה שלך באמצעות LC-MS, כדי להאיץ את המחקר שלך על מבנה חלבון.
נמצאנו מעורבים באנליזה המבנית של חלבונים של מולקולות גדולות שונות, כולל חיסונים רקורסנטיים תת-יחידתיים, ננובדיות/VHHs/antibodies חד-תחום (sdAbs), שברים של חלבונים, הורמונים/פפטידים, ציטוקינים, גורמי גידול (GF), אנזימים, קולג'נים, וכו'.
דרישות רגולטוריות למיפוי פפטידי
המדריך ICHQ6B ממליץ, "שברת מכוונת של המוצר לפסים חלבוניים בדידים מבוצעת באמצעות אנזימים או כימיקלים מתאימים והפסים החלבוניים הנוצרים מובחנים באמצעות HPLC או תהליך אנליטי אחר מתאים. יש לזהות את הפסים החלבוניים ככל האפשר באמצעות טכניקות כמו ניתוח התרכובת של חומצות אמינו, סדרת N-טרמינל או מספקטרומטריה (MS). מיפוי פס חלבוני של החומר פעיל או מוצר תרופתי (DP) באמצעות שיטה מאושרת באופן המתאים הוא שיטה שמשתמשת לעתים קרובות כדי לאשר את המבנה הרצוי של המוצר עבור שחרור חטיפות."
שיטות אנליטיות
| ניתוח |
שיטות |
| מיפוי פפטידים |
הפרכת פרוטיאז וכרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריה מסית (LC-MS) |
תהליך אנליטי
1. רדוקציה ואלכילציה
המטרה היא להפחית גשרים דיסולפידיים ולסגור את התיאול החופשי שנוצר. הפחתת הגשרים הדיסולפידיים עוזרת לפתוח את מבנה הโปรטין, מה שמאפשר תהליך חתיכת פרוטייני יעיל יותר. שלב זה גם יפרק את הגשרים בין שרשרתות במקרה של פורטינים רב-שרשרתיים שיש להם גשרים דיסולפידיים המחברים את השרשרתות (לדוגמה, אנטיבודים מונוקלוניים, mAbs).
2. חתיכה של הפורטין באמצעות אנזימים
המטרה היא לפצל את הפורטין לפסים. בחרנו את האנזימים על סמך הסדר התיאורטי של הפורטין והידע על החתיכה התיאורטית של הפורטין על ידי אנזימים. בחירת האנזימים בדרך זו אמורה להוביל לאנליזה הטובה ביותר של מיפוי הפסים.
3. ניתוח של הפסים שהופרקו שימוש בכromatographיה מופעלת-לינה הפוכה עם זיהוי באורכי גל אולטרה-סגול (UV) ובדetection מס-ספקטרומטרי עם啧spray חשמלי (LC/ES-MS).
הפרדת הפסים על סמך הפולאריות באמצעות LC (chromatographia לינה הפוכה)
כשהפפטיד יוצא מהעמודה של LC, המס-ספקטרומטר ייצור מידע מס יחד עם מידע על יוני השברים, שמאפשר לנו לקבוע את המידע על הסדרה. אנו משתמשים במידע על הסדרה כדי לאשר את זהות הפפטיד ולספק מידע ראשוני.
ניתן גם ליצור את המידע על השברים מהפפטידים כשהם נכנסים למקור של המס-ספקטרומטר מהעמודה של LC. בהתאם לדרישות המחקר, זה או LC-MS/MS מוחלט או לא מוחלט, שיכולים להיחשב כצורה של MS תándem.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
